凡納濱對蝦IRAK-4基因克隆及功能研究.pdf

1、凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)，俗稱南美白對蝦，目前已成為全球占絕對優(yōu)勢的蝦類養(yǎng)殖品種。然而，在人工養(yǎng)殖過程中，對蝦容易受到病毒、細菌、真菌等各種病害的影響。而進行對蝦免疫系統(tǒng)及其抗病害免疫機制的研究，對于預防和控制水產病害有重要意義。
　　 在無脊椎動物中，Toll信號通路和Imd信號通路介導了主要的免疫反應。白介素-1受體相關激酶-4(interleukin-1 receptor-associated

2、 kinase-4，IRAK-4)，在Toll信號通路中起著關鍵的信號傳導作用。本文首次從凡納濱對蝦cDNA中克隆到一個IRAK-4基因。凡納濱對蝦IRAK-4(LvIRAK-4)cDNA全長1706bp，編碼536aa的蛋白。功能結構預測發(fā)現，IRAK4編碼蛋白在N端含有一個死亡結構域(68-129AA)，在C端含有一個蛋白激酶結構域(259-532AA)，具有絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的活性位點。LvIRAK-4的ORF外的5'上游調控

3、區(qū)片段(共3611bp)含有一個潛在的NFkB結合位點和2個STAT1結合位點。通過比對，發(fā)現LvIRAK-4的蛋白激酶結構域與爪蟾IRAK-4(XtIRAK-4)的該區(qū)最為相似(48.2％)，其次為白眉猴(46.1％)和雜色鮑(46％)。而LvIRAK-4蛋白全長與雜色鮑的HdIRAK-4最為相似(35.6％)，其次為爪蟾(35.5％)和斑馬魚(35％)。
　　 RT-PCR結果顯示，LvIRAK-4廣泛存在于對蝦的組織中，并

4、在鰓、血細胞、盲囊和眼柄中表達量較其他組織高。本文還用RT-PCR在各種病原微生物感染6h后，分析了LvIRAK-4在凡納濱對蝦的血細胞和鰓的表達時相，發(fā)現LvIRAK-4在轉錄水平上的變化不明顯。通過融合GFP來觀察LvIRAK-4的細胞定位狀況，發(fā)現全長LvIRAK-4在細胞質內靠近質膜區(qū)形成點狀聚集，但是當單獨表達單個功能結構域時，這種精確定位現象隨即消失。
　　 通過本實驗構建的抗菌肽報告基因載體，利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)