凡納濱對蝦性腺抑制激素基因的克隆與表達.pdf

1、性腺抑制激素(gonad inhibiting hormone,GIH)是甲殼動物X-器官-竇腺復合體分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌多肽類激素,對雌、雄個體的性腺發(fā)育、蛻皮及甲基法尼酯(methyl farnesoate,MF)的分泌均有抑制作用。本文以性腺發(fā)育成熟的凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)為研究對象,利用RACE技術(shù)克隆獲得GIH基因cDNA片段(含3’UTR),預測GIH基因編碼的氨基酸序列,并利用生物信息學方法

2、進行分析；利用半定量RT-PCR方法檢測凡納濱對蝦八個不同發(fā)育時期(受精卵、無節(jié)幼體、蚤狀幼體、糠蝦幼體、仔蝦25天、仔蝦30天、仔蝦35天和仔蝦40天),以及雌雄成體不同組織(肌肉、腦、眼柄、胃腸、鰓、心臟、卵巢和精巢)中的表達,并檢測了環(huán)境內(nèi)分泌干擾物壬基酚(nonylphenol,NP,100μg/L和0.01μg/L)對凡納濱對蝦雌蝦眼柄中GIH基因表達的影響。結(jié)果表明:凡納濱對蝦GIH cDNA片段長為683bp,其中3’非編

3、碼區(qū)(3’UTR)為518bp,可讀編碼框162bp,編碼54個氨基酸,在Poly(A)尾前15bp處存在AATAAA加尾信號。凡納濱對蝦GIH與斑節(jié)對蝦相似性最高,達到96％,與刀額新對蝦相似性為72％。通過與Genbank上已知氨基酸序列進行蛋白比對,發(fā)現(xiàn)凡納濱對蝦GIH中具有CHH蛋白家族共有的4個保守的半胱氨酸殘基。凡納濱對蝦GIH基因在受精卵、幼體發(fā)育階段及仔蝦時期的眼柄中均有表達,35天時達到最高值(0.936±0.021)