凡納濱對(duì)蝦促雄性腺結(jié)構(gòu)及其性別分化的研究.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)雌雄之間的某些生物學(xué)或經(jīng)濟(jì)學(xué)性狀(如生長(zhǎng)速度、個(gè)體大小等)存在顯著差異，性成熟后個(gè)體大小相差懸殊。若實(shí)現(xiàn)他們的單性化養(yǎng)殖，則可以縮短養(yǎng)殖周期，提高產(chǎn)量。因此深入開(kāi)展凡納濱對(duì)蝦性別決定因子及其性別決定機(jī)制的研究是十分必要的。本文利用生化技術(shù)和組織學(xué)手段等，研究了凡納濱對(duì)蝦促雄性腺的結(jié)構(gòu)及其性別分化時(shí)期：檢測(cè)了眼柄粗提物的GIH(Gonad-inhibiting Hormone)活性；并

2、且采用不同濃度的眼柄粗提物對(duì)不同時(shí)期的凡納濱對(duì)蝦仔蝦進(jìn)行了浸泡處理，獲得了雌性比例較高的群體。為凡納濱對(duì)蝦性別決定機(jī)制的研究提供了基礎(chǔ)材料，表明了通過(guò)性別控制實(shí)現(xiàn)凡納濱對(duì)蝦單性化養(yǎng)殖的可能性。 利用顯微觀察和組織學(xué)連續(xù)切片的方法研究發(fā)現(xiàn)：凡納濱對(duì)蝦的促雄性腺埋于精莢囊端壺腹外側(cè)的肌肉中，呈不規(guī)則的片狀，用Harris蘇木精染色，整體被染成深藍(lán)色。組織切片觀察發(fā)現(xiàn)：體長(zhǎng)為7em左右的凡納濱對(duì)蝦雄蝦的促雄性腺細(xì)胞多為卵圓形，分散排列

3、在肌肉中，細(xì)胞核比較大，但是核質(zhì)疏松，被染成淺藍(lán)色，核仁1～2個(gè)清晰可見(jiàn)，細(xì)胞界限較清晰；體長(zhǎng)為9cm左右的凡納濱對(duì)蝦雄蝦的促雄性腺，有兩種形態(tài)的細(xì)胞：一種核質(zhì)致密嗜堿性非常強(qiáng)，細(xì)胞核被染成深藍(lán)色，核仁很難辨認(rèn)，大多呈圓形或卵圓形；另一種細(xì)胞與體長(zhǎng)為7cm的結(jié)構(gòu)相似，細(xì)胞核內(nèi)的電子密度比7cm的多，兩種細(xì)胞的數(shù)量相差不多；體長(zhǎng)為12cm左右的凡納濱對(duì)蝦促雄性腺，成團(tuán)狀排列在精莢囊的一側(cè)，各個(gè)細(xì)胞團(tuán)大小形狀不一，每個(gè)細(xì)胞團(tuán)外面都有一層很薄

4、的結(jié)締組織，第一種類型細(xì)胞居多；體長(zhǎng)為15cm左右繁殖過(guò)后的凡納濱對(duì)蝦的促雄性腺，大多數(shù)腺體細(xì)胞的細(xì)胞核固縮，細(xì)胞質(zhì)呈空泡狀。可見(jiàn)促雄性腺的結(jié)構(gòu)是逐步發(fā)育的，而且它的結(jié)構(gòu)也會(huì)隨著精巢的發(fā)育而有所不同。 對(duì)性腺未成熟且剪掉單側(cè)眼柄的雌蝦注射不同濃度(0.001、0.01、0.1、1個(gè)眼柄/ml)的眼柄粗提物，每次注射0.2～0.3ml，每隔一天注射一次。在注射三次后的第三天，將蝦體解剖取出卵巢，在倒置顯微鏡下觀察各組卵巢卵母細(xì)胞的

5、直徑。經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)：濃度為0.001個(gè)眼柄/ml的實(shí)驗(yàn)組卵巢卵母細(xì)胞的直徑顯著小于對(duì)照組(只剪單側(cè)眼柄，不注射)(0.010.05)。四個(gè)實(shí)驗(yàn)組卵巢卵母細(xì)胞的直徑皆小于空白組，濃度為0.001個(gè)眼柄/ml的實(shí)驗(yàn)組

6、以外，其余三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與空白組比較卵巢卵母細(xì)胞直徑的差異均達(dá)到顯著水平(P<0.05)。這說(shuō)明：注射引起的蝦體損傷對(duì)卵巢發(fā)育有一定的影響，但是影響不大，凡納濱對(duì)蝦眼柄粗提物具有GIH活性。 通過(guò)組織學(xué)連續(xù)切片與掃描電鏡相結(jié)合的方法，對(duì)凡納濱對(duì)蝦早期的性別分化進(jìn)行了觀察和研究。發(fā)現(xiàn)：凡納濱對(duì)蝦外部形態(tài)的性別分化最早發(fā)生在仔蝦后第37天，此時(shí)在掃描電鏡下可以觀察到雄性附肢的芽基，第45天光鏡下可以觀察到交接器；仔蝦后24天出現(xiàn)原始生殖

7、細(xì)胞(PGCS)，位于背大動(dòng)脈的兩側(cè)以及圍心腔膜的腹面，細(xì)胞個(gè)體以及細(xì)胞核明顯比周圍的細(xì)胞大，具有強(qiáng)嗜堿性，細(xì)胞核為圓形或橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)清晰可見(jiàn)，隨著生殖腺的發(fā)育，在第43天出現(xiàn)了生殖管，第55天生殖腺可以區(qū)分為精巢和卵巢。 分別在凡納濱對(duì)蝦仔蝦后17d、22d和27d，利用不同濃度(0.0001、0.01、0.1、1個(gè)眼柄/ml)的眼柄提取物，對(duì)凡納濱對(duì)蝦仔蝦進(jìn)行24h的浸泡，同時(shí)在處理次數(shù)上設(shè)置梯度，每隔五天浸泡一次，分

8、一到三次不等。被浸泡過(guò)的凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)到一定規(guī)格后，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組群體雌雄性別比例。發(fā)現(xiàn)對(duì)照組雌雄比例約為1:1；在仔蝦后17d處理的，除了濃度為0.001個(gè)眼柄/ml的實(shí)驗(yàn)組雌性率達(dá)到80％外，其余三個(gè)實(shí)驗(yàn)組雌性率均在70％～72％之間；在仔蝦后22d處理的，除了濃度為0.001個(gè)眼柄/ml的實(shí)驗(yàn)組雌性率為75％以外，其余三個(gè)濃度組都在70％左右；在27d處理的，除了濃度為0.1個(gè)眼柄/ml的雌性率為73％以外，其他三組雌性率都在6