聚β-羥基丁酸酯對(duì)凡納濱對(duì)蝦幾個(gè)重要性狀和基因表達(dá)的影響.pdf

1、本研究選用中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所培育的“壬海1號(hào)”凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)新品種，利用單因子濃度梯度法，通過在基礎(chǔ)飼料中添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的聚β-羥基丁酸酯(poly-β-hydroxybutyrate，PHB)比較對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性狀、相關(guān)的非特異性免疫基因的影響，以期獲得PHB在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的理論支持。具體研究結(jié)果如下:
　　1.選取同一家系生長狀況良好的360尾大小均勻、體型正常的凡納濱對(duì)

2、蝦仔蝦，分為6組，每組3重復(fù)。實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦分別用含0.0％（即不含PHB的空白對(duì)照組）、0.5％、1.0％、2.5％、5.0％、10.0％ PHB的飼料投喂凡納濱對(duì)蝦6周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算其存活率，增長率，非特異性免疫酶活力等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PHB對(duì)對(duì)蝦存活率無影響(P＜0.05);在PHB濃度不高于2.5％時(shí)，PHB能提高對(duì)蝦的體重增長率等，但在5.0％和10.0％ PHB濃度組中其生長性能反而受到抑制。對(duì)對(duì)蝦體內(nèi)不同組織中免疫酶活進(jìn)行測定，

3、發(fā)現(xiàn)在PHB濃度為1.0％～2.5％時(shí)對(duì)蝦的免疫酶活性上升。以上結(jié)果表明，1.0％～2.5％ PHB濃度為最適濃度，該濃度范圍內(nèi)顯著促進(jìn)L.vannamei的體重增長及非特異性免疫酶活力。
　　2.利用生長測試實(shí)驗(yàn)材料，選取0.0％及2.5％PHB濃度組，對(duì)其進(jìn)行氨氮脅迫實(shí)驗(yàn)。在養(yǎng)殖水體中加入氯化銨(NH4Cl)，使水體中氨氮終濃度為15 mg/L。實(shí)驗(yàn)中取0、3、6、12、24、48 h的凡納濱對(duì)蝦，測定其鰓絲、肝胰腺、肌肉及血

4、淋巴中免疫因子的基因表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂2.5％ PHB的對(duì)蝦體內(nèi)丙二醛(Malonaldehyde，MDA)含量均低于空白對(duì)照組，且免疫基因表達(dá)量高于不含PHB的對(duì)照組。相對(duì)于對(duì)照組，投喂2.5％ PHB的對(duì)蝦體內(nèi)免疫基因表達(dá)量均高于對(duì)照組。在氨氮脅迫后，血淋巴中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)及過氧化物酶(peroxidase，CAT)基因表達(dá)比值呈現(xiàn)先上升后下降再上調(diào)的趨勢，到48h表達(dá)量是

5、對(duì)照組的3.81倍和1.56倍(P＜0.05)。相對(duì)于血淋巴，肝胰腺及鰓中sod和cat活力則呈現(xiàn)略微下降后上升，表達(dá)水平與0h無顯著差異(P＞0.05)。而谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase，Gsh-px)、溶菌酶(lysozyme，LZM)基因表達(dá)在肝胰腺中均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍是對(duì)照組的2.24倍和2.36倍。而在血淋巴及鰓中g(shù)sh-px和lzm比值在脅迫后略微下降后上升再下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)

6、果表明，PHB對(duì)氨氮脅迫下的凡納濱對(duì)蝦具有一定的保護(hù)作用。
　　3.選取同一家系平均體重為3.95～4.52 g的同一家系的凡納濱對(duì)蝦分為6組，分別用含0.0％（（即不含PHB的空白對(duì)照組）、0.5％、1.0％、2.5％、5.0％、10.0％ PHB的飼料投喂投喂，4周后通過肌肉注射鰻弧菌懸液方式使其感染鰻弧菌，每組6重復(fù)(30尾/重復(fù)):3重復(fù)用于統(tǒng)計(jì)感染鰻弧菌后對(duì)蝦死亡率，3組用于取樣。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)各組對(duì)蝦存活率并選擇免疫保

7、護(hù)率(RPS)最高組，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測定感染鰻弧菌后48 h內(nèi)免疫基因表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦的存活率隨PHB濃度升高呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢，飼喂PHB的實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦平均存活時(shí)間均高于未飼喂PHB的實(shí)驗(yàn)組;且飼料中含有1.0％ PHB對(duì)對(duì)蝦的免疫保護(hù)率最高。對(duì)比1.0％ PHB及空白組血淋巴免疫基因表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)1.0％ PHB組對(duì)蝦體內(nèi)免疫基因表達(dá)水平高于空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，PHB能增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦抵抗鰻弧菌感染的能力

8、。
　　4.選取同一家系平均體重為3.95～4.52 g的凡納濱對(duì)蝦分為6組，每組6重復(fù):3重復(fù)用于統(tǒng)計(jì)感染白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)后對(duì)蝦死亡率，3組用于取樣。以含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0.0％，0.5％，1.0％，2.5％，5.0％，10.0％)PHB的人工配合飼料飼喂凡納濱對(duì)蝦20天后，經(jīng)人工注射的方式使對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析PHB對(duì)凡納濱對(duì)蝦抵御WSSV

9、侵染能力的影響，并選擇最高免疫保護(hù)率(RPS)組進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)基因表達(dá)量分析。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)PHB飼喂的對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后與未飼喂PHB的對(duì)蝦存活率無顯著影響(P＞0.05);但感染W(wǎng)SSV的對(duì)蝦平均存活時(shí)間隨PHB濃度上升呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢，飼喂PHB對(duì)蝦的平均存活時(shí)間均高于對(duì)照組，其中1.0％ PHB濃度組對(duì)蝦平均存活時(shí)間最長，且顯著高于空白對(duì)照組及5.0％ PHB實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。分析各組對(duì)蝦體內(nèi)病毒含量，發(fā)現(xiàn)1.

10、0％ PHB濃度組對(duì)蝦病毒含量在實(shí)驗(yàn)前期顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后，對(duì)對(duì)照組及1.0％ PHB實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦前48 h內(nèi)6個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)的sod、cat、gsh-px、lzm及abp5個(gè)基因進(jìn)行表達(dá)趨勢分析，結(jié)果表明投喂PHB的對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后血淋巴中sod、cat、gsh-px和lzm表達(dá)量呈現(xiàn)上升后下降再上升趨勢且分別在6h，6h，3h，6h達(dá)到最大值;abp在WSSV感染3h內(nèi)急速下降，隨后在12 h達(dá)到最大