“黃海一號”中國對蝦抗白斑病的SRAP分子標記.pdf

1、對蝦白斑綜合癥（White Spot Syndrome，WSS）是由對蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)引起的一種對蝦傳染性疾病，該病的典型癥狀是病蝦甲殼內(nèi)側(cè)出現(xiàn)0.5～2.0 mm的白色斑點。該病不僅傳染性強、病程短，而且致死率高，目前尚無有效的措施。中國對蝦(Fenneropenaeus Chinensis)是我國主要的對蝦養(yǎng)殖品種，同樣受到WSSV的影響，感染該病毒后產(chǎn)量嚴重下降。

2、r>　　 本研究以河北省環(huán)渤海區(qū)分布的主要的對蝦品種——中國對蝦為研究對象，于2008年和2009年連續(xù)兩年采取抽樣和有針對性的進行WSS的流行病學(xué)調(diào)查；然后監(jiān)測了中國對蝦在發(fā)病高危時期的主要水質(zhì)參數(shù)變化特點；最后應(yīng)用SRAP技術(shù)進行了中國對蝦抗WSSV的分子標記的篩選。對河北省環(huán)渤海區(qū)共8個中國對蝦養(yǎng)殖場進行的WSSV的流行病學(xué)調(diào)查，掌握了該地區(qū)WSS的發(fā)病情況和流行規(guī)律。選取滄州鑫海養(yǎng)殖場的兩個條件良好的池塘作為實驗水質(zhì)監(jiān)測池塘，

3、2008年6月至8月對其中國對蝦養(yǎng)殖水體進行了溶解氧、氨氮值和亞硝酸鹽氮值的監(jiān)測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在7月末8月初時，當水溫在25℃左右、pH值在7.85～8.12、溶解氧在7.1～8.4mg/L、亞硝酸鹽氮值在0.29～0.32mg/L、氨氮值在0.65～0.75之間時，WSSV疫情極有可能發(fā)生。用以上參數(shù)為WSSV中國對蝦水質(zhì)預(yù)警值，成功的預(yù)警了2009年秦皇島昌黎江鵬養(yǎng)殖場的對蝦白斑綜合癥的發(fā)生，降低了養(yǎng)殖場的經(jīng)濟損失。改良了中國對蝦病毒

4、DNA的提取方法，從中國對蝦肌肉組織中就可以提取適合質(zhì)量和濃度的病毒DNA供PCR監(jiān)測之用，而且取樣時間可以延長到3天～5天。通過SRAP分子標記技術(shù)，用篩選后的擴增多態(tài)性良好的52對引物對中國對蝦WSSV感病組（人工投喂感染）和抗病組進行SRAP-PCR，然后聚丙烯酰胺瓊脂糖凝膠電泳和銀染，共找到了11條特異性序列可能與中國對蝦WSSV抗性相關(guān)。進一步應(yīng)用生物信息學(xué)方法，在NCBI公共數(shù)據(jù)庫上比對，找到編號為40.3、4.20、25.