對(duì)蝦白斑綜合癥病毒感染相關(guān)分子的篩選.pdf

1、對(duì)蝦為水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中的重要經(jīng)濟(jì)品種，每年為人們帶來(lái)大量的海鮮食材并創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。但近年來(lái)不斷的病害尤其是對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(Whitespot syndrome virus，WSSV)導(dǎo)致對(duì)蝦大量減產(chǎn)，造成的直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失十分巨大。研究對(duì)蝦先天性免疫機(jī)制對(duì)于對(duì)蝦抗病害十分重要。
　　本實(shí)驗(yàn)室收集了365種對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子具有調(diào)節(jié)功能的化合物，在高等哺乳類如人和小鼠細(xì)胞中已經(jīng)通過(guò)使用這些化合物對(duì)其靶基因激活/抑制即控

2、制信號(hào)通路的開(kāi)關(guān)來(lái)研究信號(hào)通路的功能。本實(shí)驗(yàn)室在此方法基礎(chǔ)上，分離螯蝦造血組織并使用膠原酶制備單細(xì)胞懸液，將這些化合物處理細(xì)胞并人工感染W(wǎng)SSV病毒粒子，提取螯蝦造血干細(xì)胞總RNA并反轉(zhuǎn)錄得到cDNA進(jìn)行Real-TimePCR，以螯蝦40S核糖體小亞基片段作為內(nèi)參基因，通過(guò)分析WSSV極早期基因ie1的轉(zhuǎn)錄水平來(lái)判斷化合物處理后能夠促進(jìn)WSSV基因轉(zhuǎn)錄還是抑制其轉(zhuǎn)錄，最終實(shí)現(xiàn)篩選出具有抗病原微生物功能的信號(hào)通路。
　　經(jīng)過(guò)兩輪篩

3、選實(shí)驗(yàn)，我們從365種對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子具有調(diào)節(jié)功能的化合物中篩選出55種能夠影響WSSV基因轉(zhuǎn)錄的化合物，其中17種能夠促進(jìn)病毒基因ie1轉(zhuǎn)錄，38種能夠抑制其轉(zhuǎn)錄。隨后，通過(guò)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)55種化合物對(duì)細(xì)胞的毒性作用進(jìn)行分析，以期排除因化合物本身對(duì)細(xì)胞的毒性作用而產(chǎn)生的影響。
　　本研究初步篩選出部分能夠影響WSSV基因ie1轉(zhuǎn)錄的化合物，并對(duì)其在靶信號(hào)通路中的作用機(jī)制嘗試闡明。該論文為抗病原微生物信號(hào)通路的研究以及對(duì)蝦免疫的