對蝦白斑綜合癥病毒膜蛋白VP32和類膠原蛋白CLP的初步鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、對蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一種具有囊膜、無包涵體的桿狀型雙鏈環(huán)狀DNA病毒,Nimaviridae屬Whispovirus種中唯一的物種,也是嚴重危害對蝦養(yǎng)殖業(yè)的最主要病原。 目前我們的研究主要圍繞WSSV的蛋白功能開展研究。這是因為病毒蛋白參與病毒的形態(tài)構成、對宿主細胞的入侵、增殖等一系列活動,并在其中扮演了重要角色。 本論文研究分為以下兩個部分: (1

2、)質譜發(fā)現(xiàn)病毒膜蛋白VP32是ORF WSV198的編碼產物。我們構建了融合表達載體pGEX-2Th-vp32和pMAL-vp32并分別在E.coli BL-21菌株中表達純化了GST-VP32和MBP-VP32,制備了相應的抗血清。通過western-blot分析進一步證實了VP32屬于病毒膜蛋白。免疫金標定位顯示其分布在病毒囊膜上,使用去污劑0.1%Tween-20輕微處理囊膜后,金標定位顯示其似乎位于囊膜內側。進一步對其蛋白質功能

3、的研究(主要是蛋白質相互作用方面)遇到了阻力,推測是耦聯(lián)的GST/MBP影響了VP32的正確折疊,無法形成天然空間構象。 (2)WSSV ORF WSV001編碼產物類膠原蛋白(collagen-like protein, CLP)是WSSV病毒中一個非常獨特的蛋白,由1684個氨基酸組成,預測分子量為168.2 KDa。經研究分析,該蛋白含有一段特異的類膠原蛋白序列(Gly-X-Y.161-1327 aa),在病毒中發(fā)現(xiàn)該序列

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