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1、中國(guó)海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28與對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜蛋白的分離和結(jié)合活性分析姓名:解飛霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):海洋生物指導(dǎo)教師:徐懷恕黃倢2003.6.1對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(wssv)囊膜蛋白vP28與對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜蛋白的分離和結(jié)合活性分析對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性最高,在低于或高于1M時(shí)都會(huì)對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)臺(tái)活性受到影響;超聲波對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的活性影響較大,作用時(shí)間50s就可使對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的活性喪失。共選用了
2、5種表面活性劑處理對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜,包括Tween20、NP40、TritonX100、脫氧膽酸鈉、SDS(十二烷基磺酸鈉),作用濃度均為2%。前4種表面活性劑對(duì)結(jié)合活性有影響但不能使結(jié)合活性完全喪失,而SDS可使對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的活性喪失。在上述各種表面活性劑中加入了01M二硫蘇糖醇,實(shí)驗(yàn)結(jié)果區(qū)別很小,證實(shí)二硫蘇糖醇對(duì)對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性既沒(méi)有起到保護(hù)的作用也沒(méi)有起到破壞的作用。隨著蔗糖濃度的加大,對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性也隨著下降,但是當(dāng)蔗
3、糖濃度達(dá)到62%時(shí),對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性仍然沒(méi)有完全喪失。在有機(jī)溶劑中,三氯乙酸可使對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性喪失,乙醇、丙酮可使對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性有所下降,但不能完全喪失。經(jīng)2%Tween20處理的對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜,CMSepharoseFF離子交換層析,得到3個(gè)洗脫峰;合并濃縮后測(cè)定與WSSV的結(jié)合活性,并將活性組分進(jìn)行sDsP:AGE得到其蛋白多肽圖譜。2%Tween20處理后的對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜經(jīng)過(guò)SephadcxG75凝膠過(guò)濾層析濃縮
4、后測(cè)定與WSSV的結(jié)合活性,將得到的活性與蛋白量之比的最高峰進(jìn)行SDSPAGE得到其蛋白多肽圖譜。將離子交換的活性組分多肽圖譜與凝膠過(guò)濾的活性組分多肽圖譜相比較,得出分子量約為53KD的對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜蛋白具有與WSSV結(jié)合的活性。將對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜與不同濃度的肝素鈉混合,室溫放置3h,發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜不再具有與WSSV結(jié)合的能力。將病毒與不同濃度的肝素鈉混合放置同樣的時(shí)間,卻并未使病毒喪失與對(duì)蝦鰓細(xì)胞膜結(jié)合的能力。從而推斷肝素鈉能夠與病毒競(jìng)爭(zhēng)
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