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1、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是對(duì)蝦暴發(fā)性流行病的主要病原,嚴(yán)重危害對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè).病毒入侵宿主首先要和其對(duì)應(yīng)的特異受體結(jié)構(gòu),深入了解WSSV感染機(jī)制,找到編碼受體的基因,無(wú)疑對(duì)病害的防治具有基礎(chǔ)性意義.該實(shí)驗(yàn)利用酵母雙雜技術(shù)進(jìn)行了受體篩選的初步研究工作.作者利用SMART(Switching Mechanism at 5' end of RNA Transcript)技術(shù),以同源重組的方式構(gòu)建了中國(guó)明對(duì)蝦鰓細(xì)胞的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù).首先用R
2、NA提取試劑盒從中國(guó)明對(duì)蝦鰓細(xì)胞中提取總RNA,以總RNA為模板,CDS Ⅲ oligo(dT)為引物,反應(yīng)一段時(shí)間后,再加入轉(zhuǎn)換模板(switching template),繼續(xù)反應(yīng),反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈.再在DNA聚合酶下,通過(guò)長(zhǎng)距離PCR,擴(kuò)增雙鏈DNA.雙鏈cDNA經(jīng)凝膠過(guò)濾柱純化后,與線性化的pGADT7-Rec質(zhì)粒載體同源重組,轉(zhuǎn)化感受態(tài)AH109酵母菌株后,得到中國(guó)明對(duì)蝦鰓細(xì)胞的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù).經(jīng)測(cè)量該文庫(kù)的容量為2
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