常用消毒劑對(duì)白斑綜合癥病毒(WSSV)的作用及病毒在宿主的感染增殖.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（White spot syndrome virus, WSSV）是線形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒屬（Whispovirus）的唯一成員，是一種非包涵體的類(lèi)桿狀病毒，具有雙鏈環(huán)狀DNA，能感染對(duì)蝦、螯蝦等各種蝦類(lèi)。該病毒宿主范圍廣，傳染力強(qiáng)，致死率高，是養(yǎng)殖蝦類(lèi)的主要病原。本文從常用消毒劑對(duì) WSSV的殺滅作用著手，探究實(shí)驗(yàn)室及養(yǎng)殖場(chǎng)的消毒方式。此外，我們通過(guò)口服途徑感染W(wǎng)SSV，研究病毒最初侵染對(duì)蝦消化

2、系統(tǒng)的哪個(gè)組織或器官，并且研究了WSSV在宿主造血組織細(xì)胞中增殖情況及感染的病毒滴度。
　?。?）消毒劑選擇目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的消毒劑有氯化物，碘化物，過(guò)氧化物和強(qiáng)氧化物等，較少有文獻(xiàn)深入報(bào)道這些消毒劑是否對(duì) WSSV有殺滅作用及其滅活機(jī)制。本文中，我們選取了具有一定代表性的二氧化氯，碘三氧，過(guò)氧化氫和高錳酸鉀處理病毒粒子，通過(guò)分析對(duì)病毒基因組 DNA，病毒蛋白和病毒粒子感染性的影響，以確定能夠殺滅 WSSV的消毒劑的有效作用濃

3、度及作用時(shí)間。我們發(fā)現(xiàn)病毒的基因組DNA以及病毒結(jié)構(gòu)蛋白的損傷程度與病毒感染活性呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果表明，二氧化氯的有效濃度為50ppm，作用時(shí)間為60 min，能引起病毒結(jié)構(gòu)蛋白的降解，并基本上使病毒的感染活性喪失。而高錳酸鉀在25 ppm的濃度下有效作用時(shí)間為15 min，或在50 ppm的濃度下有效作用時(shí)間為5 min，幾乎能完全降解病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和基因組DNA，而且病毒粒子完全失去感染活性。此外，碘三氧和過(guò)氧化氫濃度在250 ppm以

4、內(nèi)，對(duì)WSSV沒(méi)有消毒作用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為二氧化氯和高錳酸鉀是適合作為滅活 WSSV的消毒劑。
　?。?）病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)相通過(guò)熒光定量 PCR的方法分析了WSSV在紅螯螯蝦（Cherax quadricarinatus）造血組織細(xì)胞中的增殖時(shí)相，發(fā)現(xiàn)在感染后12~24h內(nèi)，細(xì)胞中的病毒有一定量的增殖，36h反而有一定下降，一定量的病毒粒子釋放到培養(yǎng)基中。在確定合適感染復(fù)數(shù)（MOI）的實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)提取感染病毒24h的

5、細(xì)胞中的總RNA，進(jìn)行real-time RT-PCR，通過(guò)分析不同感染復(fù)數(shù)下病毒基因轉(zhuǎn)錄的情況，發(fā)現(xiàn)感染復(fù)數(shù)為MOI1000，可以達(dá)到較好的感染效果。
　?。?）病毒最初入侵的器官用含WSSV的螯蝦肌肉投喂健康對(duì)蝦來(lái)模擬自然條件下WSSV經(jīng)攝食而感染，在感染后24 h內(nèi)取不同的對(duì)蝦組織或器官，通過(guò)熒光定量 PCR的方法測(cè)定其病毒拷貝數(shù)，結(jié)果顯示通過(guò)口服感染的病毒主要在胃部增殖。以前掃描電鏡的結(jié)果也發(fā)現(xiàn)胃部能粘附更多的病毒粒子。為