對蝦白斑綜合征病毒(WSSV)囊膜蛋白與宿主細(xì)胞互作蛋白的鑒定及Cq-DYN在WSSV感染中的作用.pdf

1、對蝦白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是含有囊膜的無包涵體桿狀雙鏈DNA病毒，屬于線形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒屬（Whispovirus）。WSSV傳染能力強(qiáng)，致死率高，是養(yǎng)殖蝦類的主要病害之一，感染后可導(dǎo)致養(yǎng)殖對蝦大規(guī)模死亡。到目前為止，WSSV侵入蝦類細(xì)胞的路徑還沒有得到確切的闡述。
　　紅螯螯蝦（Cherax quadricarinatus）又名“澳洲淡水龍蝦”，是

2、世界名貴淡水經(jīng)濟(jì)蝦種之一。研究結(jié)果表明白斑綜合征病毒對淡水螯蝦同樣有致病性，感染過程類似，淡水螯蝦的造血組織(Hematopoietic tissue，Hpt)干細(xì)胞易被WSSV侵染，是一種理想的研究WSSV感染的細(xì)胞模型。本文以紅螯螯蝦Hpt為模型，利用蛋白pulldown技術(shù)研究了與WSSV囊膜蛋白相互作用的紅螯螯蝦Hpt蛋白，并進(jìn)一步研究了細(xì)胞膜膽固醇、細(xì)胞骨架和內(nèi)吞關(guān)鍵蛋白dynamin在WSSV入侵紅螯螯蝦Hpt細(xì)胞過程中的作

3、用。取得如下成果:
　　1.利用pulldown技術(shù)研究了與WSSV囊膜蛋白相互作用的紅螯螯蝦Hpt蛋白。通過SDS-PAGE分離、銀染以及質(zhì)譜鑒定，獲得14個(gè)蛋白:tubulin、actin、線粒體ATP合成酶α亞基前體、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶、血藍(lán)蛋白2、二硫鍵異構(gòu)酶、GAPDH、Hsp90、Hsp70以及Hsp60等。
　　2.利用MβCD消除細(xì)胞膜膽固醇，病毒入胞被抑制，再添加外源膽固醇使細(xì)胞膜膽固醇含量恢復(fù)，病毒入胞得到恢

4、復(fù);利用細(xì)胞松弛素B解聚細(xì)胞F-actin，病毒入胞受到抑制。上述結(jié)果表明膽固醇和細(xì)胞骨架actin在病毒感染的過程中發(fā)揮重要作用。
　　3.利用RACE技術(shù)克隆獲得紅螯螯蝦發(fā)動(dòng)蛋白Cq-dynamin cDNA全長和Cq-dynamin-1的開放閱讀編碼框（ORF）。利用RNA干擾技術(shù)敲降Cq-dynamin和Cq-dynamin-1基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)WSSV入胞被顯著抑制，表明dynamin在WSSV入胞過程中具有重要作用。