2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、本論文利用抗WSSV蛋白VP28、VP26、VP19的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)腹水并進(jìn)行了提純;利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和克氏原螯蝦(Cambarusproclarkii)檢測(cè)了單抗在不同病毒濃度下以及單抗兩兩混合的中和效果,結(jié)果表明MAb1D6(VP28)隨病毒濃度的降低,體內(nèi)中和效果越明顯;同時(shí)提取了VP28、VP26、VP19三種蛋白并通過(guò)雙向電泳對(duì)囊膜蛋白VP28進(jìn)行初步分析。具體研究結(jié)果如下: (1) WSSV

2、的提純及抗WSSV囊膜蛋白單克隆抗體的生產(chǎn):使用差速離心和蔗糖密度梯度離心法提純WSSV。復(fù)蘇了本實(shí)驗(yàn)室制備的1D6、2G3、3G7、2E9等4株單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞,通過(guò)生產(chǎn)腹水得到了足量的抗體并對(duì)其進(jìn)行提純。經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè),四株抗體與感染W(wǎng)SSV的蝦鰓均呈特異性反應(yīng)。經(jīng)Western-Blot檢測(cè),1D6、2G3能與WSSV蛋白VP28反應(yīng),3G7能與WSSV蛋白VP26反應(yīng),2E9能與WSSV蛋白VP19反應(yīng)。 (2)

3、不同病毒濃度下WSSV單抗的體內(nèi)中和實(shí)驗(yàn):通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定不同稀釋度的WSSV與已制備的WSSV襄膜蛋白單克隆抗體1D6及2E9結(jié)合的OD值。結(jié)果顯示,在1×10-3病毒稀釋度下兩種單抗均足量。利用克氏原螯蝦動(dòng)物模型,將不同稀釋度病毒與單抗1:1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯蝦(50μL/只),觀(guān)察記錄螯蝦的死亡情況。結(jié)果顯示當(dāng)病毒濃度為1×10-3、1×10-4、1×10-5、1×10-6稀釋度時(shí),MAb1D6(VP28)螯蝦

4、組最終死亡率分別為100%、90%、16.7%、6.7%,而MAb2E9(VP19)螯蝦組最終死亡率分別為100%、100%、100%、93.3%。這表明隨病毒濃度的降低,MAb1D6(VP28)的中和效果越明顯。而MAb2E9(VP19)并無(wú)明顯的中和效果。在螯蝦中和實(shí)驗(yàn)中,除陰性對(duì)照組、MAb1D6(VP28)的1×10-5、1×10-6病毒稀釋度組之外,死亡螯蝦經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè)均呈WSSV感染陽(yáng)性。 (3) WSSV混合

5、單抗的中和實(shí)驗(yàn):提取中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)血細(xì)胞膜并對(duì)WSSV進(jìn)行地高辛標(biāo)記,將單抗兩兩混合后與病毒作用,吸附對(duì)蝦血細(xì)胞膜,使用抗地高辛抗體檢測(cè)結(jié)合到血細(xì)胞膜上的病毒。結(jié)果顯示混合前后OD值無(wú)明顯變化,因此不能證明四株單抗之間具有協(xié)同作用。利用克氏原螯蝦動(dòng)物模型,將MAb1D6(VP28)與另外三株抗體分別混合,將混合液與WSSV粗提液1:1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯蝦(50μL/只),觀(guān)察記

6、錄螯蝦的死亡情況。結(jié)果顯示單抗混合之后螯蝦的累積死亡率與MAb1D6(VP28)螯蝦組的累積死亡率無(wú)顯著差異,因此不能證明MAblD6(VP28)與其他三株抗體之間具有協(xié)同作用。 (4) WSSV囊膜蛋白VP28的初步分析:通過(guò)對(duì)病毒進(jìn)行SDS-PAGE,切膠分離病毒蛋白,并洗脫提純,獲得了VP28,VP26及VP19三種蛋白。經(jīng)Western-blot檢測(cè),所提取的VP28蛋白與MAb1D6以及MAb2G3均呈陽(yáng)性反應(yīng)。將VP

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