以CotX為分子載體表面展示W(wǎng)SSV囊膜蛋白Vp19和Vp28的枯草芽孢桿菌重組芽孢的研究.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合癥(white spot syndrome，WSS)是由白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)感染甲殼動(dòng)物，尤其是對(duì)蝦引發(fā)的一種嚴(yán)重的疾病。此前的研究結(jié)果顯示，接種WSSV疫苗可有效地保護(hù)對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV所致的死亡。然而，疫苗注射接種在對(duì)蝦養(yǎng)殖中難以應(yīng)用。因此，通過(guò)對(duì)蝦口服接種抗WSSV疫苗成為研究的焦點(diǎn)?？莶菅挎邨U菌是一種非致病性的革蘭氏陽(yáng)性菌，常被用于人類食品或動(dòng)物飼料的添加劑。在

2、營(yíng)養(yǎng)缺乏或其他脅迫條件下，枯草芽孢桿菌能形成具有抗逆性的休眠體一芽孢。由于芽孢具有獨(dú)特的抗逆性，在極端的溫度、干燥、以及暴露于有機(jī)溶劑和其他毒性化學(xué)物質(zhì)等不利條件下能長(zhǎng)期存活。因此，芽孢成為在極端環(huán)境中運(yùn)載外源抗原蛋白或具有活性的生物大分子的潛在有效載體。本研究的目的是通過(guò)芽孢表面展示技術(shù)將具有保護(hù)作用的WSSV抗原展示在芽孢表面，構(gòu)建具有抗WSSV作用的表面展示W(wǎng)SSV抗原的重組芽孢。
　　 本研究的內(nèi)容和結(jié)果包括4部分：

3、r>　　 第一.以CotX為分子載體，以編碼GFP的gfp為報(bào)告基因的重組芽孢表面具有GFP綠色熒光。證明枯草芽孢桿菌的芽孢衣殼蛋白CotX位于芽孢衣殼外層，可作為芽孢表面展示外源蛋白的載體分子。
　　 第二.將芽孢衣殼蛋白基因cotX與WSSV囊膜蛋白基因vp19和vp28重組，構(gòu)建了融合表達(dá)CotX-Vp19和CotX-Vp28的整合型重組質(zhì)粒pJS747和pJS748。
　　 第三.融合表達(dá)Vp19或Vp28整合

4、型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Bacillus subtilis168，得到重組菌株DRJS747和DRJS748。誘導(dǎo)重組菌株產(chǎn)生的芽孢表面展示Vp19或Vp28。
　　 第四.以構(gòu)建的重組芽孢口服接種克氏螯蝦，接種后以WSSV進(jìn)行攻擊試驗(yàn)，分析克氏螯蝦的相對(duì)存活率。結(jié)果顯示口服重組芽孢后的克氏鰲蝦具有抗WSSV感染致死作用。
　　 本研究的主要結(jié)論包括：
　　 1.枯草芽孢桿菌的芽孢衣殼蛋白CotX位于芽孢衣殼外層，可作為芽