強啟動子枯草芽孢桿菌核黃素操縱子整合型載體的構建并在枯草芽孢桿菌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文研究的主要內容是以下內容： 通過DNA片段原生質轉化法，用帶有完整 recA 基因的 DNA 片段轉化產核黃素菌株 B．subtilis 24(recA4突變株)原生質體，恢復了B．subtilis 24的同源重組功能?；謴?recA 基因功能恢復后，菌株的核黃素產量沒有下降(為 1.3g/L)是比較理想的受體菌。 運用基因工程方法構建了帶強啟動子SP02和P43及原啟動子P1核黃素操縱子的三個B．subtil

2、is 整合型質粒，發(fā)現(xiàn)三個帶核黃素操縱子質粒都可以在大腸桿菌中能產一定量的核黃素，核黃素產量P43>P1≈SP02。然后，分別通過整合型質粒在 B．subtilis D3染色體上定點(amyE位點)整合和隨機整合研究了帶不同啟動子的核黃素操縱子在 B．subtilis 中的表達情況。定點(amyE位點)整合的轉化子中，核黃素產量P1>P43>SP02。通過比較發(fā)現(xiàn)隨機整合的效果要比定點(amyE位點)整合好，通過篩選得到了帶有P43強啟

3、動子核黃素操縱子的高產核黃素菌株，達3.1g/L。 研究了不帶啟動子的 rib 結構基因構建的多克隆載體重組子在 E．coli(Top10)中產核黃素的原因。利用PCR方法從 B．subtilis 擴增出只含核黃素操縱子中 ribA結構基因的DNA片段，克隆到E．coli 中發(fā)現(xiàn)該菌株已有一定的核黃素表達量。一方面解釋了帶rib 結構基因的多克隆載體在E． coli (Top10)中產核黃素的原因，另一方面說明了單獨增加，ri

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