枯草芽孢桿菌啟動(dòng)子片段的克隆及其在綠色熒光蛋白標(biāo)記中的應(yīng)用.pdf

1、枯草芽孢桿菌是一類重要的生防微生物種群，本實(shí)驗(yàn)室保存的這些菌株對多種作物具有良好的防病、促生、改善品質(zhì)、提高抗逆性的功能。通過現(xiàn)代生物技術(shù)對這類有益菌株進(jìn)行遺傳標(biāo)記和改良，是研究和闡明其在生態(tài)環(huán)境中的生物學(xué)規(guī)律，并進(jìn)一步將其改造為基因工程菌的重要手段與有效途徑。 本研究應(yīng)用啟動(dòng)子探針載體pECE7，從枯草芽孢桿菌ISW1214基因組克隆到一系列啟動(dòng)子活性片段，通過氯霉素濃度梯度篩選出Cm抗性最強(qiáng)的片段F78，對此片段進(jìn)行了序列測

2、定和分析。結(jié)果表明此片段與已知的枯草芽孢桿菌序列同源性高達(dá)99％，序列內(nèi)有較典型的-35區(qū)、-10區(qū)與RBS區(qū)。 將啟動(dòng)子片段F78與來自GFP表達(dá)載體pGFP4412的gfpmut3a基因插入大腸桿菌—芽孢桿菌穿梭載體pHY300PLK，獲得枯草芽孢桿菌GFP表達(dá)載體pGFP78，用其轉(zhuǎn)化野生型枯草芽孢桿菌B912、B913，熒光顯微鏡下觀察到明亮的綠色熒光，表明篩選到的啟動(dòng)子片斷具有良好的啟動(dòng)外源基因(gfp)轉(zhuǎn)錄的功能，綠