枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立及應(yīng)用.pdf

1、在植物和病原物互作的過程中，植物在響應(yīng)病原物入侵時(shí)有兩種先天免疫機(jī)制。第一層免疫機(jī)制可以識別和響應(yīng)許多種病原菌，甚至是非病原菌，該過程中植物識別的是進(jìn)化較緩慢的微生物相關(guān)因子，比如細(xì)菌鞭毛蛋白、延伸因子，真菌細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)等PAMPs(pathogen-associated molecular patterns)，該類分子誘發(fā)的植物免疫反應(yīng)稱作PTI(PAMP-triggered immunity);第二層免疫機(jī)制可以直接或者間接識別和

2、響應(yīng)病原菌的毒性因子，該過程中植物細(xì)胞內(nèi)的R蛋白識別病原菌產(chǎn)生的特異的因子，例如目前發(fā)現(xiàn)的大量的avr蛋白等，該類分子誘發(fā)的植物免疫反應(yīng)稱作ETI(effector-triggeredimmunity)。
　　枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）作為一種對環(huán)境無害的(GRAS，generally recognizedassafe)革蘭氏陽性細(xì)菌，由于其在分泌表達(dá)外源蛋白方面具備巨大的優(yōu)勢，已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等行

3、業(yè)。
　　本研究欲將枯草芽孢桿菌改造成可以分泌表達(dá)植物源多肽和avr蛋白的工程菌。用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中以增強(qiáng)植物對病原物的抵抗能力。
　　本研究主要完成了以下工作:
　　1、以pMarA載體為基本骨架，利用P43啟動子、nprB信號肽、大腸桿菌rRNA操縱子上的rmT1T2終止子、kan抗性表達(dá)框以及amyE基因的5'端和3'端，成功構(gòu)建了枯草芽孢桿菌整合表達(dá)載體pHR，并獲得轉(zhuǎn)化子;
　　2、克隆了玉米B73自交系的

4、ZmPROPEP1基因，并將該基因整合到枯草芽孢桿菌整合表達(dá)載體pHR和植物表達(dá)載體pCAMBIA3301上;
　　3、合成了番茄葉霉菌（Cladosporiumfulvum）的avr9基因，分析了農(nóng)桿菌瞬時(shí)表達(dá)載體pAvr4載體上的avr4基因表達(dá)框結(jié)構(gòu)，并將avr9基因和avr4基因以多種形式構(gòu)建到枯草芽孢桿菌的表達(dá)載體上，并獲得avr9基因和avr4基因的枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化子;
　　4、構(gòu)建了pBE2N-avr4、pHY