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文檔簡介
1、目前工業(yè)發(fā)酵原料主要來自玉米淀粉糖，隨著工業(yè)發(fā)酵規(guī)模的日益擴大，與人爭糧與糧爭地的現(xiàn)象日益嚴(yán)重。利用木質(zhì)纖維素作為工業(yè)發(fā)酵的碳源，已成為技術(shù)發(fā)展趨勢。木糖是木質(zhì)纖維素水解產(chǎn)物的主要成分，但是大多數(shù)工業(yè)微生物不能利用木糖，或者不能有效利用木糖，這是木質(zhì)纖維素作為工業(yè)發(fā)酵原料急需解決的問題之一?？莶菅挎邨U菌是重要的工業(yè)發(fā)酵菌種，其固有的木糖吸收調(diào)節(jié)機制使其不能利用木糖作為唯一碳源；其存在的糖分解代謝物阻遏機制使葡萄糖的存在抑制細胞對木糖的利
2、用。如果使枯草芽孢桿菌能夠利用木質(zhì)纖維素水解產(chǎn)物作為碳源進行工業(yè)發(fā)酵，則必需對其進行遺傳改造。
本文根據(jù)枯草芽孢桿菌木糖運輸?shù)恼{(diào)控機制，設(shè)計了敲除阻遏蛋白編碼基因araR，使木糖運輸?shù)鞍拙幋a基因araE組成型表達，而改善細胞木糖吸收能力的方案。采用兩步重疊PCR方法，拼接了帶有紅霉素抗性基因的同源重組片段Au-E-Ap，并通過TA克隆構(gòu)建了重組質(zhì)粒；經(jīng)spizizen轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌168，篩選得到了紅霉素抗性轉(zhuǎn)化子；經(jīng)P
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