癲癇突觸機(jī)制中發(fā)動(dòng)蛋白、突觸融合蛋白、突觸囊泡膜蛋白及相關(guān)蛋白研究.pdf

1、第一部分、耐藥性癲癇患者突觸囊泡相關(guān)蛋白研究
　　 目的：在本課題組既往耐藥性癲癇患者和癲癇模型腦組織基因芯片研究基礎(chǔ)上，檢測(cè)耐藥性癲癇患者腦組織中突觸囊泡功能相關(guān)蛋白的差異表達(dá)，探索突觸囊泡功能相關(guān)蛋白在耐藥性癲癇突觸機(jī)制中的作用。
　　 方法：收集耐藥性癲癇患者手術(shù)后的腦組織，按病程不同分為短病程和長(zhǎng)病程兩組，采用RT-PCR、免疫組化、免疫熒光、western blot分別對(duì)突觸囊泡相關(guān)蛋白Dnm1，Stx1和Sy

2、t1的表達(dá)部位和表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，通過與對(duì)照組的比較，探討其在耐藥性癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 結(jié)果：我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)Dnm1，Stx1和Syt1主要在神經(jīng)元胞膜和胞漿中表達(dá)。其中，Dnm1在長(zhǎng)病程和短病程的耐藥性癲癇患者中表達(dá)較對(duì)照組顯著增強(qiáng)（P<0.05），而在長(zhǎng)短病程組間無顯著差異（P>0.05）；Stx1和Syt1在長(zhǎng)病程的耐藥性癲癇患者中表達(dá)較短病程組和對(duì)照組顯著增強(qiáng)（P<0.05），Stx1和Syt1的表達(dá)在短病程和對(duì)

3、照組間無顯著差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：研究提示耐藥性癲癇患者腦組織中存在突觸囊泡相關(guān)蛋白的差異表達(dá)，這些改變?cè)谀退幮园d癇的發(fā)病及維持中可能起一定作用。其中，Dnm1主要參與網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的突觸囊泡的內(nèi)吞過程，其高表達(dá)提示在癲癇患者病程早期就存在囊泡內(nèi)吞功能的加強(qiáng)；Stx1主要與胞吐過程中囊泡與胞膜的融合有關(guān)，Syt1作為鈣感受器調(diào)節(jié)囊泡的胞吐過程，同時(shí)也與其他蛋白協(xié)同，促進(jìn)網(wǎng)格蛋白包被的形成，調(diào)節(jié)囊泡的內(nèi)吞，所以在耐藥性

4、癲癇的后期，突觸囊泡的內(nèi)吞和胞吐功能均增強(qiáng)，提示囊泡循環(huán)的增強(qiáng)在耐藥性癲癇的發(fā)生及發(fā)展中有重要作用。
　　 第二部分、耐藥性癲癇患者血液、腦脊液中Dnm1、talin2及κ-IgLC，λ-IgLC蛋白的檢測(cè)
　　 目的：本課題組在前期耐藥性癲癇患者腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，talin2蛋白出現(xiàn)在癲癇患者腦脊液中，在對(duì)照組沒有表達(dá)。talin2是一種細(xì)胞粘附因子，存在于突觸部位，可能與突觸功能相關(guān)。基于此，我們?cè)O(shè)計(jì)了本研

5、究，以進(jìn)一步了解血液、腦脊液中突觸相關(guān)蛋白Dnm1和talin2的差異表達(dá)和κ-IgLC，λ-IgLC的變化，為臨床尋找新的藥物治療靶點(diǎn)和生物標(biāo)記物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將患者分為四組：病毒性腦炎組（AE），病毒性腦炎合并癲癇發(fā)作組（AESS），治療有效腦炎后癲癇（EPEE）及難治性腦炎后癲癇組（RPEE），分別采集血清、腦脊液。運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）定量測(cè)定血清、腦脊液中的talin2，Dnm1、κ-IgLC

6、，λ-IgLC的濃度，并與對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：共62例患者納入AE組（n=16），AESS（n=16），EPEE（n=15）及RPEE（n=15）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在AE、AESS、PEE及RPEE組腦脊液中的Dnm1濃度與血清中沒有顯著差異；RPEE組腦脊液中talin2的表達(dá)顯著高于其他組，而血清中talin2低于其他組；腦脊液中κ-IgLC，λ-IgLC和相應(yīng)IgLCκ/λ比值的變化在各組中無顯著差異，而血清中κ-IgL

7、C，λ-IgLC和IgLCκ/λ比值在各組間有顯著差異：在RPEE中，血清κ-IgLC濃度較其他三組顯著增高；在RPEE中，血清λ-IgLC濃度較其他三組顯著降低，而EPEE和AESS的血清λ-IgLC濃度較AE患者顯著降低；血清IgICκ/λ比值在RPEE中顯著高于其他三組，而EPEE和AESS的血清IgLCκ/λ比值較AE患者顯著增高。
　　 結(jié)論：talin2在RPEE患者腦脊液、血清中的表達(dá)顯著增高，提示耐藥性癲癇的形成