Cq-GABARAP在對(duì)蝦白斑綜合征病毒感染中的功能研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩112頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是對(duì)蝦和其它水產(chǎn)甲殼類動(dòng)物的重要病原體,該病毒傳染能力強(qiáng)、致死率極高,給全球不同蝦類養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。到目前為止鑒于缺少可用于WSSV感染增殖的對(duì)蝦細(xì)胞系,我們對(duì)于WSSV致病機(jī)理的很多科學(xué)問(wèn)題仍知之甚少。
  最近建立培養(yǎng)的螯蝦造血組織(Hematopoietic tissue,Hpt)細(xì)胞是一種研究WSSV感染的理想細(xì)胞,本研究以紅螯螯蝦(Ch

2、erax quadricarinatus)Hpt細(xì)胞為研究模型,利用細(xì)胞免疫熒光、RNA干擾、抗體轉(zhuǎn)染和重組表達(dá)蛋白功能鑒定等技術(shù)探究了紅螯螯蝦伽馬氨基丁酸受體相關(guān)蛋白(γ-aminobutyric acidreceptor-associated protein,Cq-GABARAP)在WSSV感染中的重要作用,并初步探討了Cq-GABARAP是否通過(guò)自噬調(diào)節(jié)PI3K-Akt信號(hào)通路及Rac1信號(hào)通路影響WSSV入胞。取得成果具體如下:

3、
  1.使用亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組抽提試劑盒及細(xì)胞免疫熒光的方法對(duì)Cq-GABARAP蛋白進(jìn)行了亞細(xì)胞定位并發(fā)現(xiàn)在WSSV感染早期Cq-GABARAP與WSSV存在共定位;通過(guò)RNA干擾和抗體轉(zhuǎn)染技術(shù)敲降或封阻Cq-GABARAP蛋白后發(fā)現(xiàn)WSSV入胞減少,證明Cq-GABARAP參與WSSV入胞感染;添加重組表達(dá)的Cq-GABARAP蛋白后WSSV入胞增多,但抑制了病毒早期的轉(zhuǎn)錄復(fù)制,說(shuō)明Cq-GABARAP可能在WSSV感染細(xì)胞的不

4、同時(shí)期發(fā)揮多功能作用。
  2.為闡明Cq-GABARAP是否依賴于自噬調(diào)節(jié)PI3K-Akt信號(hào)通路影響WSSV入胞,我們首先基因克隆獲得紅螯螯蝦Cq-PI3Kcα、Cq-PI3Kcδ和Cq-Akt基因序列:Cq-PI3Kcα完整開放閱讀框(Open reading frame,ORF)為3138 bp,編碼1045個(gè)氨基酸殘基;Cq-PI3Kcδ完整ORF為3192 bp,編碼1072個(gè)氨基酸殘基;Cq-Akt完整ORF為155

5、7 bp,編碼518個(gè)氨基酸殘基。使用化學(xué)抑制劑LY294002抑制Cq-PI3K蛋白活性或使用Akt inhibitor抑制Cq-Akt蛋白活性后發(fā)現(xiàn)WSSV入胞增多,但Cq-GABARAP蛋白含量沒(méi)有發(fā)生變化,結(jié)果提示PI3K-Akt信號(hào)通路參與WSSV入胞調(diào)控,但與Cq-GABARAP無(wú)關(guān)。
  3.為解析Cq-GABARAP是否通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)吞活性來(lái)影響WSSV入胞,我們克隆獲得了GABARAP調(diào)控內(nèi)吞下游信號(hào)通路中的紅螯

6、螯蝦Rac1(Cq-Rac1)基因(GenBank登錄號(hào):KP765446)。Cq-Rac1完整ORF為588 bp,編碼195個(gè)氨基酸殘基,具有保守的RHO結(jié)構(gòu)域。使用化學(xué)抑制劑和RNA干擾技術(shù)抑制或敲降Cq-Rac1蛋白活性后WSSV入胞增多,且轉(zhuǎn)染重組表達(dá)的Cq-Rac1蛋白后WSSV入胞顯著減少,說(shuō)明Cq-Rac1負(fù)調(diào)控WSSV入胞。此外RNA干擾敲降Cq-Rac1可進(jìn)一步增強(qiáng)Cq-GABARAP介導(dǎo)的WSSV入胞促進(jìn)作用,表明

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論