病原弧菌與白斑綜合征病毒共感染對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦生長(zhǎng)與存活的影響.pdf

1、多年來，細(xì)菌性和病毒性疾病的發(fā)生和流行，給世界范圍內(nèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。凡納濱對(duì)蝦因其耐高溫、鹽度適宜范圍廣，且適宜高密度養(yǎng)殖等特點(diǎn)在世界范圍內(nèi)大規(guī)模的養(yǎng)殖，但是隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，許多病害頻繁的出現(xiàn)。白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是感染養(yǎng)殖對(duì)蝦的一種重要的病毒性病原，副溶血弧菌的感染對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖的危害也日益嚴(yán)重，病毒與細(xì)菌的交叉或疊加感染引起的對(duì)蝦死亡可能更加嚴(yán)重。

2、　　本論文研究包括三部分:(1)人工培育對(duì)蝦苗種體內(nèi)可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量及組成分析;(2)副溶血弧菌和WSSV共感染對(duì)凡納濱對(duì)蝦的成活率的影響;(3)兩株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染對(duì)凡納濱對(duì)蝦存活率的影響。
　　1.人工培育對(duì)蝦苗種體內(nèi)可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量及組成分析:為調(diào)查研究不同養(yǎng)殖場(chǎng)攜帶WSSV、IHHNV病毒與不攜帶上述2種病毒的對(duì)蝦苗種體內(nèi)可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量和組成，本章應(yīng)用常規(guī)細(xì)菌分離、培養(yǎng)與純化，細(xì)菌16SrDNA序列分析

3、等方法調(diào)查分析了山東、天津、浙江部分苗種場(chǎng)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeusvannamei）和中國(guó)明對(duì)蝦（Fenneorpenaeus chinensis）苗種體內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)以及優(yōu)勢(shì)菌的種類和數(shù)量，并用PCR的方法檢測(cè)對(duì)蝦攜帶病毒情況。結(jié)果顯示，凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦苗種體內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)均在105～107CFU/g之間，分離出的細(xì)菌分屬于弧菌屬（Vibrio）、發(fā)光桿菌屬（Photobacterium）、芽孢桿菌屬(Baci

4、llus)、鹽單胞菌屬（Halomonas）等8個(gè)屬，弧菌屬（Vibrio）在對(duì)蝦苗種體內(nèi)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，達(dá)43.80％～90.23％。凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦菌種部分樣品檢測(cè)為WSSV和IHHNV陽(yáng)性，WSSV檢出率為33.33％，IHHNV檢出率為22.22％，同時(shí)攜帶兩種病毒的檢出率為11.11％。只攜帶WSSV病毒以及同時(shí)攜帶兩種病毒的對(duì)蝦苗種體內(nèi)的總菌數(shù)在1.23×107～4.14×107 CFU/g之間，顯著高于其他批次的樣品(P

5、＜0.05)，且弧菌數(shù)量在107 CFU/g左右，顯著高于其他批次的樣品（P＜0.05）。只攜帶IHHNV以及不攜帶病毒的對(duì)蝦苗種體內(nèi)的弧菌數(shù)量為104～106 CFU/g。研究表明，弧菌屬在凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦菌種體內(nèi)普遍存在且為優(yōu)勢(shì)菌屬，并且攜帶WSSV可能會(huì)引起對(duì)蝦苗種體內(nèi)的弧菌數(shù)量增長(zhǎng)。
　　2.副溶血弧菌和WSSV共感染對(duì)凡納濱對(duì)蝦的成活率的影響:本章通過投喂的方法使凡納濱對(duì)蝦感染白斑病，注射的方法使毒力較強(qiáng)的副溶血弧

6、菌在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)潛伏感染，并分為先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌，先注射副溶血弧菌后投喂WSSV病料兩種情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。并統(tǒng)計(jì)各組凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率，用TCBS平板涂布的方法檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦血淋巴中的弧菌數(shù)量，用絕對(duì)熒光定量PCR的方法檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦鰓部的WSSV的拷貝數(shù)，以及Real-TimePCR方法檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦鰓部的相關(guān)功能基因LvMyD88、LvTube和Lvakt的表達(dá)量。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌組從開始投喂W

7、SSV病料到實(shí)驗(yàn)第10d死亡率達(dá)到100％，而先投喂WSSV病料后注射PBS組從開始投喂WSSV病料到實(shí)驗(yàn)第13d死亡率達(dá)到100％。先注射副溶血弧菌，后投喂WSSV病料組在從開始投喂WSSV病料到實(shí)驗(yàn)的第11d時(shí)凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率達(dá)到100％，只感染W(wǎng)SSV組在實(shí)驗(yàn)的第13d累積死亡率達(dá)到100％。只注射副溶血弧菌組，弧菌會(huì)在凡納濱對(duì)蝦的血淋巴中逐漸減少，而其它組的弧菌數(shù)量都顯著的增加(P＜0.05)。先投喂WSSV病料后注射副溶

8、血弧菌組、先注射副溶血弧菌后投喂WSSV和只投喂WSSV組在投喂WSSV病料后的WSSV拷貝數(shù)分別在72h、96h和144h時(shí)由105copies mg-1 tissue迅速升高到107 copies mg-1 tissue。本研究的結(jié)果提示:副溶血弧菌的感染能夠加快WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)的增殖，WSSV同時(shí)也能促進(jìn)副溶血弧菌的繁殖，副溶血弧菌的快速繁殖結(jié)合WSSV的大量增殖導(dǎo)致對(duì)蝦的大量死亡。
　　3.兩株毒力不同的副溶血弧菌和WS

9、SV共感染對(duì)凡納濱對(duì)蝦存活率的影響:本章通過注射的方法用WSSV和兩株毒力不同的副溶血弧菌感染凡納濱對(duì)蝦。并分為先注射WSSV粗提液后注射副溶血弧菌，先注射副溶血弧菌后注射WSSV粗提液兩種情況進(jìn)行試驗(yàn)。WSSV為主要病原，兩株毒力不同的副溶血弧菌用較少的劑量在對(duì)蝦體內(nèi)潛在感染。并統(tǒng)計(jì)各組凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率，用TCBS平板涂布的方法檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦血淋巴和肝胰腺中的弧菌數(shù)量，用絕對(duì)熒光定量PCR的方法檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦鰓部的WSSV的拷貝