商品肉雞呼吸道病原體共感染的檢測.pdf

1、H9N2亞型禽流感病毒(Avian Influenza virus，AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV）、禽偏肺病毒（Avian Pneumovirus viruses，aMPV）、大腸桿菌(Escherichia coli，E.Coli)、鼻氣管鳥桿菌(Ornithobacterium rhinotrache

2、ale，ORT)和禽敗血性支原體(Mycoplasma gallisepticum，M.G)是常見的能引起肉雞呼吸道疾病的病原體。這些病原體既可以單獨感染，也可以與其他一個或多個呼吸道病原體混合感染使商品肉雞發(fā)病。而當(dāng)兩種或兩種以上病原體同時或先后感染機體，可產(chǎn)生協(xié)同致病作用，比單一病原體所致疾病嚴(yán)重的多。近年來，呼吸道病原體共感染的報道越來越多，是目前導(dǎo)致我國商品肉雞呼吸道疾病難于防制的重要原因。為快速、準(zhǔn)確的對發(fā)生呼吸道疾病的肉雞臟

3、器中呼吸道病原體進行檢測，本研究將AIV H9N2的HA基因、NDV的F基因、IBV的M基因、aMPV的F基因、MG的16SRNA基因、ORT的16SRNA基因和E.Coli的16SRDNA基因的部分片段標(biāo)記為地高辛探針。經(jīng)靈敏性和特異性實驗結(jié)果表明，所標(biāo)記探針特異性強，靈敏度高。
　　 本研究從山東省不同地區(qū)的商品肉雞群和死亡雞胚中分別采集臟器樣品，用核酸探針技術(shù)對呼吸道病原體進行了檢測，以此為呼吸道疾病的防控提供流行病學(xué)資料

4、。從山東省濟南、濰坊、青島等地區(qū)肉雞群采集421份有呼吸道癥狀的病、死雞肺臟及160份臨床健康肉雞的肺臟進行上述七種呼吸道病原體的檢測。結(jié)果表明421份發(fā)病肉雞肺臟中AIV H9N2、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E.Coli的檢出率分別為53.68％、68.41％、33.49％、54.87％、57.25％、9.02％和49.17％；且存在嚴(yán)重的共感染現(xiàn)象，共感染率高達90.26％，單一感染和陰性個體僅占7.36％和2.38％

5、；發(fā)病肉雞群中七種呼吸道病原體二重、三重、四重、五重、六重、七重感染的檢出率分別達19.48％、26.12％、27.32％、11.88％、4.51％、0.95％，以二重、三重和四重感染最為常見。而臨床健康肉雞肺臟中AIV（H9N2）、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E.Coli的檢出率分別為12.50％、23.13％、5.63％、36.87％、21.88％、0％和16.88％；陰性和單一樣品所占比例分別為25.00％、43.75

6、％；多重感染樣品僅占31.25％，且主要為二重感染。上述結(jié)果表明，發(fā)病肉雞和臨床健康肉雞均存在呼吸道病原體共感染，但二者差異極顯著（P＜0.001），發(fā)病肉雞更為嚴(yán)重，呼吸道病原體多重感染是肉雞呼吸道疾病日益嚴(yán)重的重要原因。
　　 本研究對從山東省部分地區(qū)采集193份父母代發(fā)生呼吸道疾病后的死亡雞胚臟器樣品，用核酸探針技術(shù)進行上述七種呼吸道病原體的檢測。結(jié)果表明H9N2 AIV、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E.Col

7、i陽性率分別為33.33％、44.44％、26.11％、35.56％、48.33％、0％、52.22％，且存在嚴(yán)重的共感染現(xiàn)象，共感染率高達77.72％，單一感染和陰性個體僅占2.59％和19.69％；死亡雞胚中七種呼吸道病原體二重、三重、四重、五重、六重、七重感染的檢出率分別達30.56％、31.61％、11.40％、4.15％、0％、0％，多重感染主要為二、三重感染。上述結(jié)果表明，父母代發(fā)生呼吸道疾病后，雞胚孵化過程中的死亡雞胚中存

8、在呼吸道病原體的共感染，呼吸道病原體多重感染是雞胚死亡率上升的重要原因。在本研究中從山東省的發(fā)病雞群中分離了1株病毒，經(jīng)HA、HI試驗和病毒回歸試驗確定所分離的毒株為新城疫病毒，命名為LVCX。按常規(guī)方法測得LVCX株的生物學(xué)毒力指標(biāo)MDT、ICPI和IVPI分別為47.4 h、1.975和2.85，雞胚半數(shù)致死量LD50為10-9.8。通過RT-PCR擴增出了LVCX的F基因，通過分析其融合蛋白氨基酸序列發(fā)現(xiàn)，分離株LVCX屬于基因Ⅶ