豬繁殖與呼吸綜合征病毒與豬圓環(huán)病毒2型共感染對豬免疫功能影響的細胞與分子機制.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)和豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2)是可以導致感染豬發(fā)生免疫抑制的兩種病毒。本研究通過分析PRRSV和PCV2共感染豬體內病毒含量和血清抗體水平、外周血白細胞亞群以及外周血單個核細胞(PBMCs)中細胞因子mRNA轉錄的動態(tài)變化，揭示PRRSV和PCV2共感染對豬免疫功能

2、影響的細胞和分子機制。 應用RT-PCR/PCR技術，分別擴增并克隆PRRSV、PCV2和豬細胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α和β-actin的部分基因片段，獲得了各種分子的陽性重組質粒。通過實時熒光定量PCR方法(Real-timeFQ-PCR)，建立了這些病毒和細胞因子的標準曲線及其直線回歸方程，并確定其最適讀板溫度。 20頭6周齡普通豬被

3、分成空白對照組、PRRSV或PCV2單感染組以及PRRSV和PCV2共感染組4個組，每組5頭。攻毒后，采用Real-timeFQ-PCR技術對感染豬血清、組織器官、PBMCs中的病毒含量進行檢測，采用間接ELISA法對血清中的特異性抗體進行檢測，采用MTT法對外周血淋巴細胞(PBLCs)的增殖能力進行檢測。結果表明，PRRSV和PCV2共感染組血清、組織器官、PBMCs中PRRSV的含量均顯著高于PRRSV單感染組，PCV2的含量均顯著

4、高于PCV2單感染組；PRRSV和PCV2共感染組血清中PRRSV、PCV2特異性抗體陽轉的時間晚于并且水平低于PRRSV或PCV2單感染組；共感染和單感染組PBLCs增殖能力受到抑制的嚴重程度依次為：PRRSV/PCV2組＞PRRSV組＞PCV2組。由此表明，PRRSV和PCV2在豬體內的增殖具有相互促進作用，對感染豬體液免疫和細胞免疫的抑制具有加重作用。 采用血常規(guī)法、CD21和SWC3a單色流式細胞術以及CD3/CD4/C

5、D8三色流式細胞術對PRRSV、PCV2單感染和共感染豬外周血白細胞亞群的含量進行分析。結果表明，PRRSV和PCV2共感染組在感染早期(10DPI前)各類白細胞亞群含量比單感染組顯著下降，白細胞、淋巴細胞、單核細胞、NK細胞、Tc細胞、活化/記憶T細胞下降特別明顯；此后各類白細胞亞群含量逐漸上升，絕大多數(shù)在14～35DPI間顯著升高。由此表明，在病毒感染早期，PRRSV和PCV2共感染可導致比單感染更加嚴重的免疫抑制，PRRSV和PC

6、V2共感染對機體的免疫抑制具有加重作用。 采用Real-timeFQ-PCR技術對PRRSV、PCV2單感染和共感染豬PBMCs中促炎細胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)、Th1型細胞因子(IL-2、IL-12p40、IFN-γ)以及Th2型細胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)mRNA轉錄水平進行分析。結果表明，PRRSV和PCV2共感染導致促炎細胞因子、Th1型和Th2型細胞因子mRNA轉錄水平的下調比