與乙型肝炎病毒包膜蛋白前S1區(qū)結合的肝細胞膜蛋白的研究.pdf

1、【目的】
　　尋找人肝臟細胞膜上乙型肝炎病毒（HBV）前S1區(qū)（preS1）的結合蛋白，為進一步研究HBV感染早期病毒與細胞相互作用機制的研究打下基礎。
　　【方法】
　　1.用人肝癌細胞(HepG2)建立分離受體蛋白的方法，步驟如下：①preS1肽段釣取結合的膜蛋白：用生物素標記的preS1肽段為釣餌，與提取的膜蛋白4℃孵育過夜，加入鏈霉親和素標記的磁珠，洗滌磁珠后收集結合蛋白。②SDS-PAGE電泳分離結合蛋白。③

2、選取目的條帶進行LC-MS/MS質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫檢索。
　　2.用上述建立的免疫磁珠分離法獲取人肝組織與preS1結合的膜蛋白，對質(zhì)譜結果中蛋白的功能及其在HBV感染中的作用綜合分析后，選取熱休克蛋白96（gp96）作為preS1的候選受體，免疫組化法驗證其在人肝臟組織上的表達及分布情況。
　　【結果】
　　1.HepG2細胞膜上與preS1結合的蛋白，通過SDS-PAGE電泳分離出了16條帶，在45kD-97kD之間

3、有9條帶，大于97kD處有5條帶，小于20kD處有2條帶；選取其中的6條帶，質(zhì)譜分析出14種蛋白。
　　2.人肝臟組織膜上與preS1結合的蛋白，通過SDS-PAGE電泳分離出了18條帶，在45kD-97kD之間有13條帶，大于97kD處有4條帶，小于20kD處有1條；選取其中的11條帶，質(zhì)譜分析出15種蛋白；免疫組化結果顯示 gp96在人肝組織中細胞漿和細胞膜均有表達。
　　3.兩者質(zhì)譜分析結果顯示有兩種相同的蛋白即肌動蛋

4、白β（actinβ）和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）。
　　【結論】
　　1.免疫磁珠分離法可有效獲得肝細胞膜上preS1結合的蛋白，是一種快速有效的分離受體蛋白的方法。
　　2.質(zhì)譜分析的蛋白主要是與物質(zhì)運輸、細胞信號轉(zhuǎn)導、抗原提呈、免疫調(diào)節(jié)以及能量代謝相關的蛋白。
　　3.gp96能與 preS1特異結合并且在肝細胞膜上表達，研究結果表明gp96可作為preS1的候選受體之一，其與細胞信號傳導、天然免疫相關