與乙型肝炎病毒包膜蛋白前S1區(qū)結(jié)合的肝細(xì)胞膜蛋白的研究.pdf

1、【目的】
　　尋找人肝臟細(xì)胞膜上乙型肝炎病毒（HBV）前S1區(qū)（preS1）的結(jié)合蛋白，為進(jìn)一步研究HBV感染早期病毒與細(xì)胞相互作用機制的研究打下基礎(chǔ)。
　　【方法】
　　1.用人肝癌細(xì)胞(HepG2)建立分離受體蛋白的方法，步驟如下：①preS1肽段釣取結(jié)合的膜蛋白：用生物素標(biāo)記的preS1肽段為釣餌，與提取的膜蛋白4℃孵育過夜，加入鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠，洗滌磁珠后收集結(jié)合蛋白。②SDS-PAGE電泳分離結(jié)合蛋白。③

2、選取目的條帶進(jìn)行LC-MS/MS質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫檢索。
　　2.用上述建立的免疫磁珠分離法獲取人肝組織與preS1結(jié)合的膜蛋白，對質(zhì)譜結(jié)果中蛋白的功能及其在HBV感染中的作用綜合分析后，選取熱休克蛋白96（gp96）作為preS1的候選受體，免疫組化法驗證其在人肝臟組織上的表達(dá)及分布情況。
　　【結(jié)果】
　　1.HepG2細(xì)胞膜上與preS1結(jié)合的蛋白，通過SDS-PAGE電泳分離出了16條帶，在45kD-97kD之間

3、有9條帶，大于97kD處有5條帶，小于20kD處有2條帶；選取其中的6條帶，質(zhì)譜分析出14種蛋白。
　　2.人肝臟組織膜上與preS1結(jié)合的蛋白，通過SDS-PAGE電泳分離出了18條帶，在45kD-97kD之間有13條帶，大于97kD處有4條帶，小于20kD處有1條；選取其中的11條帶，質(zhì)譜分析出15種蛋白；免疫組化結(jié)果顯示 gp96在人肝組織中細(xì)胞漿和細(xì)胞膜均有表達(dá)。
　　3.兩者質(zhì)譜分析結(jié)果顯示有兩種相同的蛋白即肌動蛋

4、白β（actinβ）和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）。
　　【結(jié)論】
　　1.免疫磁珠分離法可有效獲得肝細(xì)胞膜上preS1結(jié)合的蛋白，是一種快速有效的分離受體蛋白的方法。
　　2.質(zhì)譜分析的蛋白主要是與物質(zhì)運輸、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、抗原提呈、免疫調(diào)節(jié)以及能量代謝相關(guān)的蛋白。
　　3.gp96能與 preS1特異結(jié)合并且在肝細(xì)胞膜上表達(dá)，研究結(jié)果表明gp96可作為preS1的候選受體之一，其與細(xì)胞信號傳導(dǎo)、天然免疫相關(guān)