靶向HCV包膜蛋白的信標適體應(yīng)用于病毒檢測的研究.pdf

1、丙型肝炎病毒(HCV)感染了全球大約3％（約1.7億）的人口，是肝臟疾病的主要病原體之一，可導(dǎo)致急性或慢性感染，慢性丙型肝炎可發(fā)展成肝硬化或肝癌，丙型肝炎每年新發(fā)病例約3.5萬例。HCV以血液傳播為主，發(fā)病隱匿，且癥狀不典型，患者容易因未能及時診斷而錯過治療的最佳時機。目前尚未開發(fā)出有效的HCV疫苗，現(xiàn)有的HCV臨床檢測存在窗口期較長，容易出現(xiàn)漏診或假陽性檢測結(jié)果，難以滿足大通量檢測和血液快速篩查的要求。因此，改善和發(fā)展HCV早期檢測的

2、新方法迫在眉睫。
　　 HCV包膜蛋白E1、E2是HCV病毒顆粒的結(jié)構(gòu)蛋白，它們以非共價鍵形成異二聚體E1E2，主要參與細胞受體相互作用，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體，在病毒的感染和病毒顆粒的形成過程起關(guān)鍵作用，對HCV包膜蛋白的研究是熱點之一。
　　 本論文成功擴增出HCV E1E2，并將目的基因插入到pET28b載體中，進行誘導(dǎo)表達和純化，得到大量E1E2蛋白。本論文首次以HCV包膜蛋白E1E2為靶分子，經(jīng)指數(shù)富集配體系統(tǒng)進

3、化技術(shù)(SELEX)篩選出特異性結(jié)合的核酸適體一Aptamer。進一步進行體外原核表達HCV E1、HCV E2蛋白，運用ELONA法（酶聯(lián)寡核苷酸檢測法）對篩選出來的Aptamer的特異性從反面進行了鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)篩選出的Aptamer能特異性地識別E1E2蛋白和E2蛋白，而不識別E1蛋白。將篩選得到的Aptamer修飾成分子信標核酸適體(molecular beacon aptamer，MBA)，簡稱信標適體。Aptamer實現(xiàn)了“