柑橘特異分子標(biāo)記與進(jìn)化關(guān)系分析.pdf

1、柑橘（Citrus）是多年生木本果樹，具有復(fù)雜的遺傳背景，經(jīng)過長期雜交和芽變選種，其進(jìn)化關(guān)系更為復(fù)雜。為了能有效區(qū)分和鑒定柑橘種質(zhì)資源，前人通過DNA分子標(biāo)記等方法區(qū)分和鑒定柑橘種質(zhì)資源。柑橘RAPD分析篩選出的一個(gè)特異隨機(jī)引物OPA08能區(qū)分柑橘三屬八大類的種質(zhì)資源。為了揭示該引物所具有的特殊性，本研究深入分析了隨機(jī)引物OPA08與柑橘遺傳信息之間的關(guān)系。本研究采集了涵蓋柑橘三屬的22個(gè)材料用OPA08引物進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，對擴(kuò)增結(jié)果

2、進(jìn)行了PCR-Southern雜交分析，并從電泳特征帶中回收了23條特異片段進(jìn)行測序分析。通過序列比對和聚類分析，印證了各種質(zhì)之間的進(jìn)化關(guān)系，支持前人對于柑橘進(jìn)化關(guān)系的分析，并發(fā)現(xiàn)這些序列與反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子具有較高同源性，說明反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子對柑橘的進(jìn)化具有重要作用。主要結(jié)果如下：
　　 1．建立了穩(wěn)定的RAPD擴(kuò)增體系：2μl 10×buffer：2.0 mmol/L Mg2+；0.2 mmol/LdNTPs：0.5μmol/L OP

3、A08引物；100ng模板DNA和0.5 U Taq酶。通過此體系擴(kuò)增得到清晰的電泳特征帶。
　　 2．對RAPD擴(kuò)增電泳產(chǎn)物的PCR-Southern雜交結(jié)果顯示，以紐荷爾OPA08-280bp特征帶標(biāo)記的探針僅與酸橙、椏柑、葡萄柚的相同位置帶有強(qiáng)雜交信號(hào)。而宜昌橙OPA08-280bp特征帶標(biāo)記的探針則與寬皮柑橘OPA08-200bp、柚子OPA08-280bp、檸檬OPA08-400bp和OPA08-500bp特征帶有較強(qiáng)

4、的雜交信號(hào)，而且在大片段處雜交帶較多。這些結(jié)果表明，紐荷爾OPA08-280bp特征帶代表的是較新產(chǎn)生的橙類特異遺傳信息，而宜昌橙OPA08-280bp特征帶則攜帶有屬于柑橘類植物共有的一些遺傳信息，說明宜昌橙應(yīng)該是較為原始的基本種之一。
　　 3．聚類分析和序列比對結(jié)果表明，柚子、枳殼、檸檬的OPA08-310bp特征帶及寬皮柑橘類OPA08-200bp特征帶有較高的同源性，含有一部分相同的遺傳信息。甜橙、酸橙、椏柑的OPA0

5、8-280bp特征帶相似度較高，且與金柑OPA08-500bp特征帶有部分同源。宜昌橙OPA08-280bp特征帶與檸檬、粗檸檬OPA08-500bp特征帶的相似度較高。
　　 4．測序序列的生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，OPA08引物在不同柑橘植物中擴(kuò)增得到的片段均與反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子有較高同源性，說明反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子對柑橘變異和進(jìn)化具有重要作用。反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的傳遞可以為人們研究和分析柑橘類植物的遺傳進(jìn)化關(guān)。
　　 6系提供有效的證據(jù)