津力達(dá)顆粒對(duì)1型糖尿病大鼠生長(zhǎng)激素-胰島素樣生長(zhǎng)因子-1系統(tǒng)及腎臟的影響.pdf

1、糖尿病(DM)系胰島素分泌或功能障礙所致的一組內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，以慢性血糖升高為特征表現(xiàn)。長(zhǎng)期的高糖狀態(tài)及代謝紊亂引起的大血管及微血管病變嚴(yán)重?fù)p害了人們的健康。糖尿病腎病(DN)作為微血管病變的臨床表現(xiàn)之一，以彌漫性腎小球基膜厚度增加、腎小球系膜區(qū)域擴(kuò)張、腎小管-間質(zhì)纖維樣變?yōu)樘攸c(diǎn)。近年來研究表明，除了胰島素缺乏的原因，體內(nèi)多種升糖激素也參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展，如生長(zhǎng)激素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素等。目前認(rèn)為生長(zhǎng)激素（GH）

2、及其下游的胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）參與糖尿病的進(jìn)展及糖尿病腎臟病變。
　　1型或2型糖尿病患者均存在GH/IGF-1系統(tǒng)的紊亂，GH分泌過多則是1型糖尿病控制不佳的表現(xiàn)。1型糖尿病患者機(jī)體內(nèi)胰島素絕對(duì)不足，導(dǎo)致GH下游IGF-1的合成減少，而IGF-1水平下降反過來削弱了其對(duì)GH的負(fù)反饋抑制，致使GH高水平，機(jī)體存在GH抵抗。因GH可升高血糖，IGF-1則具有胰島素樣作用而使血糖下降，故高水平的GH和低水平的IGF-1可

3、使血糖控制難度增加。而在腎臟局部組織內(nèi)，GH、IGF-1為高水平狀態(tài)，兩者均為生長(zhǎng)因子，具有較強(qiáng)的促細(xì)胞增殖、分裂的作用，可通過激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)系統(tǒng)等信號(hào)通路，引起腎臟細(xì)胞增生、腎小球肥大、系膜基質(zhì)沉聚，最終發(fā)展為腎小球硬化、腎小管-間質(zhì)纖維沉積。
　　中醫(yī)認(rèn)為“消渴癥”的發(fā)生系“脾”（即胰腺）之運(yùn)化水谷精微功能的異常所致。津力達(dá)顆粒以“健脾運(yùn)精”為治療原則，以人參、黃芪、玉竹、佩蘭、茯苓等為主要成分，從補(bǔ)氣健脾

4、、滋陰旺脾等多方面發(fā)揮功效，從而達(dá)到有效控制血糖，減少糖尿病并發(fā)癥的目的。既往已證實(shí)津力達(dá)顆?？蓽p輕炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激，對(duì)胰島β細(xì)胞有保護(hù)作用。
　　本研究主要研究不同劑量津力達(dá)顆粒、津力達(dá)+通心絡(luò)復(fù)方制劑、二甲雙胍、沙格列汀干預(yù)治療1型糖尿病大鼠8周后，對(duì)糖尿病大鼠生長(zhǎng)激素/胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（GH/IGF-1）系統(tǒng)及腎臟的影響。實(shí)驗(yàn)分為兩部分:第一部分:通過檢測(cè)1型糖尿病大鼠循環(huán)內(nèi)葡萄糖、糖化血紅蛋白、胰島素、C肽、生長(zhǎng)激素

5、、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1以及肝臟生長(zhǎng)激素受體的水平，觀察1型糖尿病GH/IGF-1系統(tǒng)指標(biāo)的變化，以及津力達(dá)顆粒對(duì)GH/IGF-1系統(tǒng)的作用;第二部分:通過檢測(cè)1型糖尿病大鼠腎臟GH/IGF-1系統(tǒng)各指標(biāo)的水平、MAPK通路蛋白和纖維連接蛋白(FN)表達(dá)及腎臟組織HE、Masson、PAS染色，觀察津力達(dá)顆粒對(duì)1型糖尿病大鼠腎臟是否存在保護(hù)作用，探討相關(guān)的機(jī)制。
　　研究目的:通過觀察不同劑量津力達(dá)顆粒

6、對(duì)1型糖尿病大鼠GH/IGF-1系統(tǒng)及腎臟的影響，探討其降糖及對(duì)腎臟作用的可能機(jī)制，進(jìn)一步了解津力達(dá)顆粒的作用。
　　研究方法:采用鏈脲佐菌素(STZ，60mg/kg)一次性腹腔注射制備1型糖尿病SD大鼠模型，隨機(jī)分組為糖尿病模型組(DM)、低/中/高劑量津力達(dá)組（JL/JM/JH）、中劑量津力達(dá)+通心絡(luò)組(JM+T)、二甲雙胍組(Met)、沙格列汀組(Sax)，另設(shè)有正常對(duì)照組(NC)，分別予以藥物或安慰劑灌胃8周。
　　

7、第一部分:RIA、ELISA等檢測(cè)血清空腹葡萄糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、胰島素(FINS)、C肽、生長(zhǎng)激素(GH)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）;RT-PCR檢測(cè)肝臟生長(zhǎng)激素受體(GHR) mRNA。
　　第二部分:RT-PCR檢測(cè)腎臟GH、GHR、IGF-1、IGF-1R、IGFBP-1 mRNA; Western Blot檢測(cè)腎臟MAPK系統(tǒng)及纖維連接蛋白(

8、FN);腎臟組織的HE、masson、PAS染色。
　　結(jié)果:
　　1、血液生化指標(biāo):同NC組大鼠相比，DM組大鼠的FBG、HbA1C水平明顯升高，F(xiàn)INS、C肽水平明顯降低。同DM組相比，JM、JH、JM+T、Met、Sax組大鼠的FBG水平降低;JM、JH、JM+T、Met組大鼠的HbA1C水平降低;JL、JM、JH、JM+T、Met組大鼠的FINS水平升高;各藥物治療組C肽水平均升高。
　　2、循環(huán)GH/IGF-

9、1系統(tǒng)指標(biāo):同NC組相比，DM組大鼠的GH、IGFBP-1水平明顯升高，IGF-1水平明顯下降，DM組大鼠的肝臟GHR mRNA水平降低。同DM組相比，各藥物治療組GH水平均降低，IGF-1水平均升高;JL、JH、JM+T組大鼠的IGFBP-1水平降低;JM+T、Met組大鼠的肝臟GHR mRNA水平升高。
　　3、腎臟組織GH/IGF-1系統(tǒng)指標(biāo):同NC組相比，DM組大鼠的腎臟GH、GHR、IGF-1、IGF-1R、IGFBP-

10、1的mRNA表達(dá)水平升高。同DM相比，JM、JH、JM+T、Met組大鼠的腎臟GHmNA水平降低，IGF-1 mRNA水平降低;各治療組腎臟GHR mRNA水平均降低;JL、JM、JH、JM+T、Met組大鼠的腎臟IGF-1R mRNA水平降低;JM+T組大鼠的腎臟IGFBP-1 mRNA水平降低。
　　4、腎臟組織MAPK系統(tǒng)及FN:同NC組相比，DM組大鼠的腎臟p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、FN水平均升高，p-p38

11、/p38水平降低。同DM相比，除JL組，其他藥物治療組p-ERK/ERK水平降低;p-JNK/JNK水平均降低;各藥物治療組p-p38/p38水平均升高，F(xiàn)N水平均降低。
　　5、腎臟組織形態(tài)學(xué):HE染色鏡下示NC組大鼠的腎小球輪廓及周圍腎小管結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞間界限清晰。DM組大鼠的腎皮質(zhì)變薄，腎小球輪廓不清，數(shù)量減少，腎小管結(jié)構(gòu)模糊，細(xì)胞界限不清。相對(duì)于NC組，DM組大鼠腎臟的Masson染色鏡下示腎小管-間質(zhì)中藍(lán)染部分增加，即膠