胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ與糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變關(guān)系的研究.pdf

1、本研究旨在通過(guò)建立糖尿病周圍神經(jīng)病變（DPN）動(dòng)物模型，檢測(cè)胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）、蛋白激酶B(proteinkinaseB，PKB，也稱為Akt)在背根神經(jīng)節(jié)(dorsalrootganglion，DRG)的表達(dá)水平及DRG神經(jīng)元的凋亡情況，探討IGF-Ⅰ與DPN的關(guān)系。 方法：1.糖尿病大鼠模型制備：雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(體重200g左右)16只，按體重隨機(jī)分為兩組：正常對(duì)照組6只，糖尿病

2、組10只。糖尿病組通過(guò)一次性腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg體重，誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型，注射3d后測(cè)尾靜脈血糖，高于16.7mmol/L者入選。2.電生理檢查：糖尿病造模成功后，于8周、10周時(shí)用2﹪戊巴比妥麻醉大鼠，采用英國(guó)牛津公司肌電圖/誘發(fā)電位儀測(cè)定右側(cè)坐骨神經(jīng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(motornerveconductionvelocity，MNCV)、感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(sensorynerveconductionvelocity

3、，SNCV)、各自的復(fù)合動(dòng)作電位波幅及F波最短潛伏期(minimumF-wavelatency，minFLat)。3.病理標(biāo)本制備及觀察指標(biāo)：10周電生理檢測(cè)后次日，心臟取血測(cè)定血糖、糖化血紅蛋白(HbA1c)后，處死大鼠，立即完整取出背根神經(jīng)節(jié)(dorsalrootganglion，DRG)和坐骨神經(jīng)。右側(cè)坐骨神經(jīng)用于透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)變化；左側(cè)DRG石蠟包埋、切片用于免疫組織化學(xué)染色方法觀察IGF-Ⅰ、Akt在DRG的表達(dá)情況，

4、并用Image-pro-plus顯微攝像分析系統(tǒng)對(duì)染色程度進(jìn)行光密度量化分析；采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TdT-mediateddUTP-biotinnickendlabeling，TUNEL法)觀察DRG神經(jīng)元的凋亡情況，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞率。 結(jié)果：1.糖尿病組大鼠成模率70﹪。10周時(shí)糖尿病組大鼠血糖(23.33±4.96mmol/L)較對(duì)照組(5.70±1.25mmol/L)明顯升高(P＜0.001)，

5、HbAlc(5.80±0.76﹪)較對(duì)照組(2.25±0.07﹪)明顯升高(P＜o(jì).001)，體重(239±40g)較對(duì)照組(352±63g)明顯降低(P＜0.001)。2.8周糖尿病組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV(31.70±2.88m/s)較對(duì)照組(41.78±4.27m/s)明顯減慢(P＜0.05)，SNCV(31.05±4.97m/s)較對(duì)照組(38.97±2.33m/s)明顯減慢(P＜0.05)，minFLat(8.30±0.62ms

6、)較對(duì)照組(7.13±0.52ms)明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)。10周糖尿病組大鼠坐骨神經(jīng)MNCV(27.54±4.95m/s)較對(duì)照組(40.25±1.77m/s)明顯減慢(P＜0.05)，SNCV(26.63±3.40m/s)較對(duì)照組(35.03±3.61m/s)明顯減慢(P＜0.05)，minFLat(8.43±0.96ms)較對(duì)照組(7.31±0.23ms)明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)。3.透射電鏡下，糖尿病組大鼠坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)觀察

7、發(fā)現(xiàn)髓鞘板層結(jié)構(gòu)消失，代之以密度不等的顆粒樣變，軸突內(nèi)容物減少，造成髓鞘向內(nèi)凹陷。4.IGF-Ⅰ陽(yáng)性染色主要分布在胞漿，糖尿病組的表達(dá)[(16.63±4.45)×10-2]較對(duì)照組[(20.92±0.91)×10-2]減低(P＜0.05)。Akt陽(yáng)性染色主要分布在胞漿，部分分布在胞核，糖尿病組的表達(dá)[(42.42±3.47)×10-3]較對(duì)照組[(54.41±9.10)×10-3]減低(P＜0.05)。 5.糖尿病組和對(duì)照組TU

8、NEL檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)論：1.糖尿病大鼠成模后8周、10周時(shí)，神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，出現(xiàn)DPN的電生理改變；10周時(shí)電鏡下出現(xiàn)神經(jīng)結(jié)構(gòu)改變。2.在電生理、電鏡改變的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)IGF-Ⅰ表達(dá)減低和磷酸化的Akt減少，說(shuō)明IGF-Ⅰ減低可能通過(guò)減少Akt的激活，阻斷磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而引起DPN的發(fā)生。3.TUNEL檢測(cè)10周糖尿病大鼠DRG中未出現(xiàn)神經(jīng)元凋亡，可能與動(dòng)物模型血糖升高水平不夠和/或凋