CaMBP-10的全長cDNA克隆與鑒定及其脂結(jié)合活性的研究.pdf

1、鈣調(diào)素(CaM)是Ca<'2+>信號傳導(dǎo)系統(tǒng)中極其重要的組成部分,其諸多調(diào)節(jié)功能是通過與其結(jié)合蛋白(CaMBP)的相互作用而實現(xiàn)的.因此鈣調(diào)素結(jié)合蛋白的研究對了解Ca<'2+>/CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)有重要意義.CaMBP-10為該研究組近年在中國大白菜中發(fā)現(xiàn)并分離得到的一種新的具有重要生理意義的鈣調(diào)素內(nèi)源結(jié)合蛋白,在前期研究中克隆得到了CaMBP-10成熟蛋白的cDNA序列.為了深入研究CaMBP-10的細胞定位與功能,最終揭示其與CaM

2、之間的調(diào)節(jié)機制,我們必須對CaMBP-10進行進一步的分子水平研究.這樣就迫切需要得到包括5′非編碼區(qū)在內(nèi)的CaMBP-10 cDNA全序列,并對其進行各種分析鑒定.因此,該實驗采用了5′-RACE方法去克隆CaMBP-10基因,并成功得到了的包括5'非編碼區(qū)序列在內(nèi)的CaMBP-10的cDNA全序列.Northern blot分析表明CaMBP-10 cDNA全長654bp,編碼117個氨基酸,序列分析顯示其N端1-25氨基酸為信號肽

3、,26-117氨基酸為成熟蛋白肽段.Southern blot分析表明在中國大白菜基因組中,編碼CaMBP-10的基因為單拷貝基因.在NCBI上進行的序列比對顯示它和植物非特異性轉(zhuǎn)脂蛋白(nsLTPs)具有極高的同源性.為了確認CaMBP-10與nsLTPs的關(guān)系,我們對純化的天然CaMBP-10進行了脂質(zhì)結(jié)合活性的相關(guān)研究,證明CaMBP-10確實具有脂質(zhì)結(jié)合活性這一nsLTPs的共性,并對CaMBP-10、CaM以及脂質(zhì)分子之間的關(guān)