中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性的基因芯片測(cè)定及其對(duì)曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響.pdf

1、細(xì)胞色素P4502D6(cYP2D6)是一種重要的藥物代謝酶，參與臨床近百種重要藥物的代謝，而且對(duì)藥物的代謝呈現(xiàn)出明顯的個(gè)體差異和種族差異，這是造成臨床用藥個(gè)體差異的重要原因。CYP2D6是最具有基因多態(tài)性的藥物代謝酶，目前己發(fā)現(xiàn)有七十多個(gè)變異位點(diǎn)。本研究擬制備基因芯片，測(cè)定中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性的分布頻率，并研究不同基因型的中國(guó)健康志愿者體內(nèi)曲馬多和美托洛爾的代謝特點(diǎn)及其對(duì)兩藥相互作用的影響。 1．基因芯片法測(cè)定中國(guó)

2、人群CYP2D6基因多態(tài)性 根據(jù)CYP2D6基因序列的多態(tài)性分布特點(diǎn)，針對(duì)在中國(guó)人群藥物代謝中具有潛在作用的突變位點(diǎn)C188T和G4268C(CYP2D6*2和CYP2D6*10)，設(shè)計(jì)寡核苷酸探針，制備寡核苷酸芯片，測(cè)定312例中國(guó)健康志愿者CYP2D6的基因型，并使用直接測(cè)序法對(duì)分型結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，探討基因芯片技術(shù)應(yīng)用于CYP2I)6基因分型的可行性。結(jié)果312例中國(guó)健康志愿者中CYP2D6*2和CYP2D6*10的變異頻率

3、分別為CYP2D6*2W*10w 8.3％，*2H*10W 13.5％，*2M*10W *10.69，0，*2M*10H 17.0％，*2M*10M 34.6％，*2H*10H 9.6％，*2H術(shù)10M 6.4％。對(duì)部分樣本采用直接測(cè)序的方法進(jìn)行進(jìn)一步確證，結(jié)果完全吻合。說(shuō)明本研究建立的基因芯片適用于中國(guó)人群CYP2D6基因分型研究。 2．中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的影響按照變異位點(diǎn)，篩選40例健康志愿者

4、，分為四組進(jìn)行試驗(yàn)，每組10人。第 一組：CYP2D6*2W*10W，第二組：CYP2D6*2H*10W和CYP2D6*2M*10W，第三組:CYP2D6*2M*10H,第四組:CYP2D6*2M*10M。各組健康志愿者單劑口服曲馬多100 mg后,采集24 h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的血樣和尿樣,使用高效液相色譜法測(cè)定血漿和尿液中的曲馬多及其代謝產(chǎn)物O-去甲基曲馬多的濃度,計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),比較不同基因型志愿者體內(nèi)曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的特點(diǎn),分析中

5、國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的影響。測(cè)定曲馬多的代謝表型,在體內(nèi)驗(yàn)證基因芯片的分型結(jié)果,考察曲馬多作為中國(guó)人群CYP2D6新型探針?biāo)幬锏目尚行?。結(jié)果表明,CYP2D6*2的變異對(duì)于曲馬多的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程沒(méi)有影響,CYP2I)6*2M*10H對(duì)曲馬多的代謝活性與CYP2D6*2W*10W相比顯著降低,CYP2D6*2M*10M的代謝活性更低,呈現(xiàn)基因劑量效應(yīng),CYP2D6*10位點(diǎn)的變異是影響曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的主要因素,

6、CYP2D6的基因型是CYP2D6代謝表型的主要決定因素。3.中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響選擇參加曲馬多單劑藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)的四組健康志愿者,每組志愿者在第1日單次口服100mg酒石酸美托洛爾片,采集24h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的血樣和尿樣。使用高效液相色譜法測(cè)定血漿和尿液中的美托洛爾及其代謝產(chǎn)物α-羥基美托洛爾的濃度,計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。自第3日起,聯(lián)合服用50mg鹽酸曲馬多片和50mg酒石酸美托洛爾片,

7、連服5日,最后一日同時(shí)服用100 mg鹽酸曲馬多片和100 mg酒石酸美托洛爾片后,采集32小時(shí)內(nèi)的血樣和尿樣,使用高效液相色譜法測(cè)定血漿和尿液中的曲馬多及其代謝產(chǎn)物O-去甲基曲馬多、美托洛爾及其代謝產(chǎn)物α-羥基美托洛爾的濃度,計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),從以下幾個(gè)方面進(jìn)行分析比較: (1)聯(lián)合服藥前后,不同基因型志愿者體內(nèi)美托洛爾藥代動(dòng)力學(xué)的改變; (2)聯(lián)合服藥前后,不同基因型志愿者體內(nèi)曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的改變;

8、 (3)CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響。 通過(guò)上述比較,說(shuō)明CYP2D6*10的變異對(duì)于中國(guó)人群美托洛爾的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程具有顯著影響。CYP2D6*2M*10M與CYP2D6*2M*10H志愿者相比藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)變化更加明顯,具有一定的"基因劑量"效應(yīng),CYP2D6基因型是CYP2D6代謝表型的主要決定因素。美托洛爾和曲馬多聯(lián)合服用后，美托洛爾和曲馬多的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與單獨(dú)應(yīng)用時(shí)相比，均有顯著

9、性差異，說(shuō)明兩藥合用存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，使美托洛爾和曲馬多的代謝均減慢。而且CYP2D6*2W*10w基因型志愿者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)改變最大，CYP2D6*2M*10M基因型志愿者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)改變最小。說(shuō)明中國(guó)人群CYP2D6的基因多態(tài)性對(duì)于美托洛爾和曲馬多的代謝性相互作用具有顯著性的影響。本研究建立的基因芯片具有簡(jiǎn)便、快捷、靈敏度高等特點(diǎn)，適用于中國(guó)人群大批量的cYP2D6基因分型研究，具有重要的實(shí)用價(jià)值。本研究從基因水平探討了藥物