中國人群CYP2D6基因多態(tài)性的基因芯片測定及其對曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響.pdf

1、細胞色素P4502D6(cYP2D6)是一種重要的藥物代謝酶，參與臨床近百種重要藥物的代謝，而且對藥物的代謝呈現(xiàn)出明顯的個體差異和種族差異，這是造成臨床用藥個體差異的重要原因。CYP2D6是最具有基因多態(tài)性的藥物代謝酶，目前己發(fā)現(xiàn)有七十多個變異位點。本研究擬制備基因芯片，測定中國人群CYP2D6基因多態(tài)性的分布頻率，并研究不同基因型的中國健康志愿者體內(nèi)曲馬多和美托洛爾的代謝特點及其對兩藥相互作用的影響。 1．基因芯片法測定中國

2、人群CYP2D6基因多態(tài)性 根據(jù)CYP2D6基因序列的多態(tài)性分布特點，針對在中國人群藥物代謝中具有潛在作用的突變位點C188T和G4268C(CYP2D6*2和CYP2D6*10)，設(shè)計寡核苷酸探針，制備寡核苷酸芯片，測定312例中國健康志愿者CYP2D6的基因型，并使用直接測序法對分型結(jié)果進行驗證，探討基因芯片技術(shù)應(yīng)用于CYP2I)6基因分型的可行性。結(jié)果312例中國健康志愿者中CYP2D6*2和CYP2D6*10的變異頻率

3、分別為CYP2D6*2W*10w 8.3％，*2H*10W 13.5％，*2M*10W *10.69，0，*2M*10H 17.0％，*2M*10M 34.6％，*2H*10H 9.6％，*2H術(shù)10M 6.4％。對部分樣本采用直接測序的方法進行進一步確證，結(jié)果完全吻合。說明本研究建立的基因芯片適用于中國人群CYP2D6基因分型研究。 2．中國人群CYP2D6基因多態(tài)性對曲馬多藥代動力學(xué)的影響按照變異位點，篩選40例健康志愿者

4、，分為四組進行試驗，每組10人。第 一組：CYP2D6*2W*10W，第二組：CYP2D6*2H*10W和CYP2D6*2M*10W，第三組:CYP2D6*2M*10H,第四組:CYP2D6*2M*10M。各組健康志愿者單劑口服曲馬多100 mg后,采集24 h內(nèi)不同時間點的血樣和尿樣,使用高效液相色譜法測定血漿和尿液中的曲馬多及其代謝產(chǎn)物O-去甲基曲馬多的濃度,計算藥代動力學(xué)參數(shù),比較不同基因型志愿者體內(nèi)曲馬多藥代動力學(xué)的特點,分析中

5、國人群CYP2D6基因多態(tài)性對曲馬多藥代動力學(xué)的影響。測定曲馬多的代謝表型,在體內(nèi)驗證基因芯片的分型結(jié)果,考察曲馬多作為中國人群CYP2D6新型探針?biāo)幬锏目尚行浴＝Y(jié)果表明,CYP2D6*2的變異對于曲馬多的藥代動力學(xué)過程沒有影響,CYP2I)6*2M*10H對曲馬多的代謝活性與CYP2D6*2W*10W相比顯著降低,CYP2D6*2M*10M的代謝活性更低,呈現(xiàn)基因劑量效應(yīng),CYP2D6*10位點的變異是影響曲馬多藥代動力學(xué)的主要因素,

6、CYP2D6的基因型是CYP2D6代謝表型的主要決定因素。3.中國人群CYP2D6基因多態(tài)性對曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響選擇參加曲馬多單劑藥代動力學(xué)試驗的四組健康志愿者,每組志愿者在第1日單次口服100mg酒石酸美托洛爾片,采集24h內(nèi)不同時間點的血樣和尿樣。使用高效液相色譜法測定血漿和尿液中的美托洛爾及其代謝產(chǎn)物α-羥基美托洛爾的濃度,計算其藥代動力學(xué)參數(shù)。自第3日起,聯(lián)合服用50mg鹽酸曲馬多片和50mg酒石酸美托洛爾片,

7、連服5日,最后一日同時服用100 mg鹽酸曲馬多片和100 mg酒石酸美托洛爾片后,采集32小時內(nèi)的血樣和尿樣,使用高效液相色譜法測定血漿和尿液中的曲馬多及其代謝產(chǎn)物O-去甲基曲馬多、美托洛爾及其代謝產(chǎn)物α-羥基美托洛爾的濃度,計算藥代動力學(xué)參數(shù),從以下幾個方面進行分析比較: (1)聯(lián)合服藥前后,不同基因型志愿者體內(nèi)美托洛爾藥代動力學(xué)的改變; (2)聯(lián)合服藥前后,不同基因型志愿者體內(nèi)曲馬多藥代動力學(xué)的改變;

8、 (3)CYP2D6基因多態(tài)性對曲馬多與美托洛爾代謝性相互作用的影響。 通過上述比較,說明CYP2D6*10的變異對于中國人群美托洛爾的體內(nèi)藥代動力學(xué)過程具有顯著影響。CYP2D6*2M*10M與CYP2D6*2M*10H志愿者相比藥代動力學(xué)參數(shù)變化更加明顯,具有一定的"基因劑量"效應(yīng),CYP2D6基因型是CYP2D6代謝表型的主要決定因素。美托洛爾和曲馬多聯(lián)合服用后，美托洛爾和曲馬多的藥代動力學(xué)參數(shù)與單獨應(yīng)用時相比，均有顯著

9、性差異，說明兩藥合用存在競爭性抑制作用，使美托洛爾和曲馬多的代謝均減慢。而且CYP2D6*2W*10w基因型志愿者的藥代動力學(xué)參數(shù)改變最大，CYP2D6*2M*10M基因型志愿者的藥代動力學(xué)參數(shù)改變最小。說明中國人群CYP2D6的基因多態(tài)性對于美托洛爾和曲馬多的代謝性相互作用具有顯著性的影響。本研究建立的基因芯片具有簡便、快捷、靈敏度高等特點，適用于中國人群大批量的cYP2D6基因分型研究，具有重要的實用價值。本研究從基因水平探討了藥物