云芝和樹舌靈芝共培養(yǎng)挖掘新穎次生代謝產(chǎn)物.pdf

1、基因組測(cè)序表明正常實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下，真菌基因組很多次級(jí)代謝產(chǎn)物合成的基因簇是沉默表達(dá)的。共培養(yǎng)是激活沉默基因挖掘新穎次級(jí)代謝產(chǎn)物的策略之一。本研究中，15種木腐真菌和2種草腐真菌首先用于構(gòu)建共培養(yǎng)體系，在所有的136組共培養(yǎng)組合中，云芝（Trametes versicolor）和樹舌靈芝（Ganoderma applanatum）共培養(yǎng)的抑制區(qū)有明顯的拮抗線和顏色變化，因此被選擇作為共培養(yǎng)模型。數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)代謝組分析發(fā)現(xiàn)有62個(gè)差異化合物，

2、包括共培養(yǎng)后新合成和共培養(yǎng)后含量明顯增加的化合物。分子網(wǎng)絡(luò)（molecular network analysis）對(duì)這些誘導(dǎo)的差異化合物二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)包含木糖苷化合物及其相應(yīng)的糖苷配體的次級(jí)網(wǎng)絡(luò)。借助核磁共振譜（NMR）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS），對(duì)這個(gè)次級(jí)網(wǎng)絡(luò)中化合物2和3進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析，通過驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)化合物均是由樹舌靈芝刺激下的云芝產(chǎn)生的。借助生物信息學(xué)方法對(duì)云芝整個(gè)基因組序列進(jìn)行比對(duì)分析，成功預(yù)測(cè)出6個(gè)可能的

3、編碼木糖基轉(zhuǎn)移酶以實(shí)現(xiàn)木糖基化的基因，其中基因 XP_008043378.1是最可能的備選基因。此外，細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)表明，化合物2在低濃度時(shí)具有提高呼吸道上皮細(xì)胞Beas-2B的細(xì)胞活性的潛力。同時(shí)，在樹舌靈芝中首次檢測(cè)到苯乳酸和苔色酸（化合物1和5），驗(yàn)證其可能來自于對(duì)云芝壓力的防御。目前，我們成功的建立了一個(gè)激活沉默基因表達(dá)以獲得新穎化合物的有價(jià)值共培養(yǎng)平臺(tái)。這個(gè)平臺(tái)將在繼續(xù)開發(fā)其他新穎化合物中起著重要作用。此研究也將提供解析在真菌防