多效因子對培養(yǎng)葡萄細(xì)胞及其次生代謝產(chǎn)物的影響.pdf

1、白藜蘆醇是一種植物抗毒素(phytoalexin)，具有抗氧化、抗自由基活性、降血脂、抗腫瘤、抗誘變、抗衰老等作用。本論文首次采用植物組織培養(yǎng)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)篩選出一種白藜蘆醇含量較高的葡萄細(xì)胞系，系統(tǒng)地研究了營養(yǎng)和環(huán)境因子對該細(xì)胞系的影響，比較了從搖床到反應(yīng)器放大培養(yǎng)過程中細(xì)胞的生長和白藜蘆醇積累情況，并就大規(guī)模生產(chǎn)條件下培養(yǎng)體系中細(xì)胞生長與接種量、溶解氧和剪切力等因子間的關(guān)系進(jìn)行了探討。 以葡萄皮為外植體，在MS培養(yǎng)基中添

2、加NAA 6.0mg/L+6-BA 0.6mg/L，有利于培養(yǎng)材料成活率的提高和愈傷組織的形成。每21天左右繼代一次，愈傷組織生長良好。用繼代培養(yǎng)7-10天的愈傷組織進(jìn)行液體培養(yǎng)，每15天繼代一次，懸浮細(xì)胞增殖迅速。 葡萄細(xì)胞系Jf01在搖瓶培養(yǎng)和生物反應(yīng)器培養(yǎng)中均保持了其母株生長速度快、分散性好的優(yōu)點(diǎn)，并且白藜蘆醇的合成能力也有了明顯提高，是一種高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)細(xì)胞系。 Jf01細(xì)胞系在一定范圍內(nèi)對環(huán)境因子的變化不敏感，具有較

3、強(qiáng)的耐受性。其生長的最適蔗糖濃度為30g/L；最適pH值為5.8(滅菌前)；最適攪拌轉(zhuǎn)速為150rpm；最適接種量為l00-150g/L鮮重。細(xì)胞在增殖階段對溶解氧具有一定的濃度要求，耗氧高峰在培養(yǎng)初期。攪拌轉(zhuǎn)速增加時(shí)，剪切力隨之增大，細(xì)胞團(tuán)聚集的細(xì)胞數(shù)減少，引起細(xì)胞變形、破碎，生物量的積累受到抑制甚至下降并導(dǎo)致細(xì)胞溶解和白藜蘆醇合成的減少。 在搖瓶培養(yǎng)和生物反應(yīng)器培養(yǎng)過程中，Jf01細(xì)胞系的生長狀況和白藜蘆醇合成均未發(fā)生顯著改