釀酒酵母葡萄糖耐量因子對脂肪細胞葡萄糖代謝的影響.pdf

1、葡萄糖耐量因子(Glucose Tolerance Factor，GTF)是由三價鉻、半胱氨酸、天門冬氨酸、甘氨酸和谷氨酸組成的鉻復(fù)合物，具有協(xié)同胰島素促進葡萄糖代謝的生物活性。本研究以富鉻能力強、遺傳性能穩(wěn)定、綜合指標(biāo)高的耐鉻性 GTF高產(chǎn)釀酒酵母菌株YSI-3.7為出發(fā)菌株，通過發(fā)酵罐培養(yǎng)，提取GTF，研究其對胰島素抵抗型脂肪細胞葡萄糖代謝的影響。主要實驗結(jié)果如下：
　　在搖瓶發(fā)酵工藝的基礎(chǔ)上，通過15L和50L逐級放大實驗，

2、對篩選菌株富鉻能力進行研究。結(jié)果表明，通過50L發(fā)酵罐發(fā)酵工藝，菌株YSI-3.7有機鉻含量為1234μg/g，總鉻含量為1502μg/g，有機鉻占總鉻百分含量為82％，干菌體生物量為0.96g/100mL發(fā)酵液，濕菌體生物量為6.00g/100mL發(fā)酵液。菌株在發(fā)酵過程中保持較好的富鉻性能和較高的生物量，其富鉻能力是市售富鉻酵母產(chǎn)品的2-5倍，該菌種綜合生產(chǎn)性能良好。
　　利用氨水提取高鉻酵母菌粉中有機鉻，聯(lián)用SuperdexT

3、M75和Sephadex G25凝膠過濾層析對提取物進行純化，得到五個 A254峰，其中第二個 A254峰與鉻峰吻合，收集鉻峰，利用反相高效液相（RP-HPLC）進一步對鉻峰進行分離，得到三個 A254峰，其中第一個 A254峰和鉻峰重合，收集鉻峰，繼續(xù)上反相高效液相色譜柱，出現(xiàn)一個 A254峰，鉻峰與之重合且對稱分布，表明經(jīng)過多步柱層析純化后，得到GT F純化品。
　　以3T3-L1脂肪細胞為研究對象，通過10-7mmol/L胰

4、島素誘導(dǎo)處理48h使3T3-L1脂肪細胞產(chǎn)生胰島素抵抗。用純化的GTF及其他來源鉻作用抵抗型細胞（GTF添加量以鉻計），觀察其對細胞葡萄糖代謝的影響，結(jié)果顯示當(dāng)GTF與胰島素共同作用細胞時，細胞葡萄糖消耗量呈劑量依賴效應(yīng)，當(dāng)鉻濃度為1μg/mL時，羅格列酮、GTF、吡啶酸鉻和三氯化鉻分別可使細胞葡萄糖消耗量提高3.1倍、2.5倍、1.7倍和1.2倍，表明GTF具有顯著調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的活性，同等劑量條件下，GTF作用效果高于其他來源鉻。<