注射葡萄糖對軍曹魚糖代謝和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因表達的影響.pdf

1、魚類特別是肉食性魚類對糖類的利用能力低下，極大地限制了糖類作為廉價能源在飼料中的用量，如何提高魚類對飼料中糖類的利用已經(jīng)成為魚類營養(yǎng)研究領(lǐng)域中的一個熱點話題。弄清魚類糖代謝機制非常有必要。本試驗以軍曹魚（Rachycentroncanadum）為研究對象，研究注射葡萄糖對軍曹魚血漿生化指標(biāo)、肝/肌糖原、糖酵解酶活和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因(glucose transporter，GLUT)表達的影響。
　　本試驗選取體重約為85±3g的

2、軍曹魚作為研究對象，分成兩個試驗組，分別腹腔注射0.68％的生理鹽水和60mg/100g體重的葡萄糖溶液，在注射后0、1、2、4、8、12、24和48h進行采樣。結(jié)果表明:與對照組相比，葡萄糖注射組軍曹魚血糖及血漿甘油三酯和膽固醇均發(fā)生了顯著性變化(p＜0.05)，分別于注射后1h、8h和48h達到最大值，但血漿中總蛋白含量未受顯著影響。注射葡萄糖后，軍曹魚肝糖原呈先升后降趨勢，在8h達到最高水平(p＜0.05)，但肌糖原無明顯變化(p

3、＞0.05);血漿胰島素在2h達到最高峰值，隨后顯著下降(p＜0.05);丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)活性在注射之后4h達到最高水平(p＜0.05)，隨后下降，但己糖激酶(hexokinase，HK)和果糖-6-磷酸激酶（6-phosphofructokinase，PFK）活性并不受顯著影響(p＞0.05)。
　　軍曹魚GLUT家族成員GLUT4已經(jīng)被報道，本研究中新克隆獲得軍曹魚5個GLUT家族成員（GLU

4、T1、GLUT2、GLUT3、GLUT5及GLUT9）的cDNA片段。通過RT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)，新發(fā)現(xiàn)的5個GLUT成員在軍曹魚13個被檢組織中表達，其中，GLUT1在前腸組織中表達量最高，GLUT5在性腺中表達量最高，GLUT2、GLUT3和GLUT9均在幽門盲囊中表達量最高。分析注射葡萄糖對已知的6個GLUT家族基因在軍曹魚肝臟和肌肉中表達水平的影響發(fā)現(xiàn)，注射葡萄糖后，肝臟中GLUT2表達量發(fā)生顯著改變，24h時上升至最大值;與

5、對照組相比，GLUT3表達量在所有檢測時間點均顯著升高;GLUT5表達量呈先上升后下降趨勢，在12h達到最大值，相較對照組上升了4.0倍。但是，GLUT1、GLUT4和GLUT9的表達量相較于對照組均無顯著改變。在肌肉中，注射葡萄糖僅對GLUT1和GLUT3的表達產(chǎn)生顯著影響。注射葡萄糖之后，肌肉GLUT1和GLUT3均呈先上升后下降趨勢，其中，GLUT1在2h時達到最大值，為對照組的2.1倍;GLUT3則在4h上升到最高值。
　

6、　為了深入研究GLUT在軍曹魚糖代謝中發(fā)揮的功能，本研究采用RACE-PCR技術(shù)，克隆獲得了GLUT1及GLUT2的基因全長，并對其進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明，軍曹魚GLUT1基因cDNA序列全長2531 bp（GenBank登錄號:KU955598），其開放閱讀框（Open Reading Frame，ORF）區(qū)長1440bp，編碼479個氨基酸。GLUT2基因（GenBank登錄號:KU955599）cDNA序列全長1380bp，