章體液葡萄糖測定

1、第九章體液葡萄糖檢驗,糖的生理功能：提供能量，人體60%以上的能量來自于糖的氧化分解；構成人體的組織結構，如糖蛋白構成結締組織和細胞間質，也參與細胞間的信息傳遞，與細胞免疫和識別有關；糖脂是神經組織和細胞膜的重要組分糖的存在形式：多糖-淀粉，雙糖-蔗糖、乳糖和麥芽糖等，單糖-葡萄糖、果糖等。,糖的消化和吸收,食物中的糖類必須經過消化道水解酶分解為單糖才能被吸收。唾液和胰液中含有a-淀粉酶，催化淀粉水解生成麥芽糖，在小腸內淀粉可完全水

2、解成葡萄糖；食物中的蔗糖、乳糖被相應的酶作用生成葡萄糖、果糖和半乳糖。食物中的糖類水解為單糖，在小腸上段吸收，吸收方式有主動轉運、單純擴散和異化擴散。,葡萄糖吸收后的代謝狀況,葡萄糖經過門靜脈入肝，部分經肝靜脈入體循環(huán)，運輸?shù)礁鹘M織進行代謝。進入肝細胞的葡萄糖大部分合成肝糖原而儲存，一部分分解氧化供肝細胞所需能量，還可轉化為脂肪和非必需氨基酸。肝糖原可分解為葡萄糖再進入血液。血糖隨血流進入組織，一部分氧化利用，一部分轉變成糖原而儲存

3、。,血糖的來源,食物中糖的消化和吸收：主要來源；肝糖原的分解：空腹時血糖的直接來源；糖異生：禁食時，肝臟可將甘油、有機酸和生糖氨基酸的非糖物質轉化為葡萄糖。單糖轉化：肝臟可以將其他的己糖如果糖、半乳糖等轉化為葡萄糖。,血糖的去路,在組織細胞內氧化供能，為主要去路。在肝臟、肌肉等組織合成糖原。轉變?yōu)榉翘俏镔|，如甘油、脂肪酸和非必需氨基酸等以合成脂肪和蛋白質等。轉變?yōu)槠渌麊翁羌捌溲苌?，如核糖、脫氧核糖等?血糖濃度的調節(jié)途徑,

4、肝臟的調節(jié):神經-激素-酶（雙相調節(jié)）糖降低時通過肝糖原分解和糖原異生而升高，反之，肝糖原合成和轉變非糖物質而降低。神經系統(tǒng)的調節(jié)：通過下丘腦和自主神經系統(tǒng)控制激素的分泌。激素的調節(jié)：降糖激素（胰島素）和升糖激素,胰島素（insulin）,生物學活性 由B細胞分泌的蛋白類激素，51個氨基酸殘基組成的兩條多肽鏈，以單肽鏈前胰島素形式合成并儲存，在酶作用下產生活性胰島素和無活性的C-肽釋放入血。首先與靶細胞膜表面特異性受體結合，改變結

5、構，觸發(fā)第二信使內化學改變，促使葡萄糖進入靶細胞，并增強其活性，促進糖原合成，轉變成其他物質而降低血糖。,胰島素的作用,加快葡萄糖進入細胞的轉化速率促進糖原的合成加速糖的氧化分解促進糖轉變?yōu)橹疽种铺钱惿?胰島素生物學活性的影響因素,靶細胞膜上胰島素受體數(shù)目(相對/絕對)到達靶細胞膜的胰島素濃度胰島素與靶細胞受體的親和力胰島素與受體結合后細胞內的改變情況,升高血糖的激素及作用,胰高血糖素：a細胞分泌多肽類激素。腎上腺素：

6、胺類激素。都能促進肝糖原分解和糖異生加強，使血糖升高。糖皮質激素：類固醇激素，促進糖異生和單糖的吸收。甲狀腺素：氨基酸類激素。促進單糖吸收、加速糖原分解和糖異生作用；促進糖酵解和有氧氧化?？傏厔菔寡巧?。,高血糖癥和糖尿病,概念:FPD>7.0mmol/L分類：生理性和病理性（糖尿?。┨悄虿〉脑\斷標準：1.癥狀+隨機血糖>=11.1mmol/L2.空腹血糖>=7.0mmol/L3.OGTT2h血糖>

7、;=11.1mmol/L癥狀不典型，需再次證實。,糖尿病的分類,胰島素依賴型糖尿?。╥nsulin dependent diabetes millitus，IDDM）1型，青春期。胰島素非依賴型糖尿?。╪oninsulin de-pendent diabetes millitus，IDDM）2型，中年肥胖，受體數(shù)減少或缺陷，不敏感。繼發(fā)性糖尿病：嗜鉻細胞瘤、庫欣病等。,糖尿病的代謝變化,三大代謝均發(fā)生改變，表現(xiàn)為高血糖：肝糖原分

8、解加強，蛋白質動員加強，糖異生加強，血糖來源增加(組織對糖的攝取減少)，去路減少。糖尿(超過腎糖閾)、多尿(高滲性利尿)。高脂血癥和高膽固醇血癥。酮血癥。乳酸血癥,低血糖癥,概念：血糖<2.2mmol/L.出現(xiàn)相應征候群。原因：來源<去路.激素效應：胰島素分泌過多，腎上腺皮質功能和垂體功能低下，生長激素缺乏；肝病變-肝糖原減少，糖異生障礙；長期饑餓或劇烈運動。分類：空腹性低血糖-高胰島素血癥、內分泌疾病和自身免疫

9、性疾?。淮碳ば缘脱?外源性、反應性、酒精性等。,酮體,概念：原因：糖尿病、糖攝取不足、糖原儲積病和堿中毒等。生成測定方法:氧化鐵試驗-乙酰乙酸;硝普鈉反應-乙酰乙酸高出丙酮2-~30倍臨床意義,半乳糖血癥,Galactosemia：機體不能利用半乳糖及其中間代謝產物的一種常染色體隱性遺傳病。特征：血、尿半乳糖增高。原因：酶缺乏.半乳糖和半乳糖-1-磷酸沉積于晶狀體，使之腫大混濁引起白內障，沉積于腎臟引起腎性氨基酸尿和腎性酸

10、中毒等。,血糖測定方法的種類,無機化學法有機化學法酶法,無機化學法（Folin-Wu法1926）,原理：葡萄糖的醛基具有還原性，與堿性銅試劑共熱，可使Cu 2+還原成Cu+，后者使磷鉬酸還原成藍色化合物，其顏色的深淺與葡萄糖的含量成正比。特點：特異性差，容易受還原性物質的影響，現(xiàn)已被淘汰。,有機化學法,利用糖的醛基與有機試劑（鄰甲苯胺、鄰苯胺、氨基聯(lián)苯等）反應。鄰甲苯胺法：在熱醋酸溶液中，葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺的氨基縮合脫水，生

11、成藍綠色化合物，其顏色的深淺在一定范圍內與血糖含量成正比。 縮合-脫水-重排-藍綠色化合物鄰甲苯胺+葡萄糖-葡萄糖基胺-希夫氏堿,方法學評價,優(yōu)點：較Folin-Wu法特異，試劑的性能好，價格低廉，測定結果與GOD-POD相同?；厥章蕿?8%，CV在2~4%之間。線性范圍在2.2mmol/L以上。易受多因素的干擾，血紅蛋白、膽紅素、麝香草酚、EDTA（>1mg/ml）、氟化鈉 （>5mg/ml）等均可

12、影響測定結果。,酶法（GOD、HK和GLU-LD）,HK HK催化標本中的GLU與ATP反應，生成ADP 和G-6-P，后者在G-6-PD存在時，與NADP+作用，產生6-磷酸葡萄糖酸內酯及NADPH。GLU+ATP----G-6-P+ADPG-6-P+ NADP+-6-磷酸葡萄糖酸內酯及NADPH。NADPH在340nm處有最大吸收峰特異性高，敏感度高，干擾因素少，試劑昂貴。,GOD法,GLU+O2+H2O--GOD--葡萄

13、糖酸內酯+H2O2H2O2+4-AAP+酚--POD--紅色醌類化合物操作簡單，特異性較高，是血糖測定的首選方法，但溶血和還原性物質可致負偏差。線性范圍可達19mmol/L，回收率94%~105%，CV<3%。,臨床意義,生理性或暫時性高血糖（餐后情緒激動）病理性高血糖（糖尿病、其他內分泌疾病、應激性高血糖、脫水血液濃縮、肝臟?。┥硇曰驎簳r性低血糖（饑餓-劇烈運動）病理性低血糖藥物,糖耐量試驗（glucose to

14、lerance test）,耐糖現(xiàn)象糖耐量降低糖耐量試驗口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）靜脈葡萄糖耐量試驗,OGTT適應癥,空腹血糖在臨界值（6~7mmol/L）而疑為糖尿病者；空腹或餐后血糖正常，但有發(fā)展為糖尿病可能的人群；糖耐量試驗異常的危險人群妊娠性糖尿病的診斷；臨床出現(xiàn)腎病、神經病變和視網膜病而又無法解釋者；流行病學研究,糖耐量試驗的標準化（WHO）,試驗前3天，受試者每日食物含糖量不應低于150g，且維持正?；?/p>

15、動。在3天前停用影響糖的藥物，且空腹10~16h。坐位取血后5min內飲入250ml含75g的溫水；妊娠婦女用100g，兒童按1.75g/kg體重，最多不能超過75g。,糖耐量試驗的標準化（WHO）,服糖后分別于30、60、120和180min各取血一次，共4次。每隔1h留取尿標本1次。試驗過程中禁止吸煙、喝咖啡或進食。以測定血糖的時間為橫坐標，血糖濃度為縱坐標，繪制曲線。,糖耐量試驗的臨床意義,糖尿病性糖耐量：曲線延遲恢復至空

16、腹水平糖耐量受損：2h后仍在8~11mmol/L之間，稱為亞臨床DM或無癥狀DM。妊娠性糖尿?。ǚ逝帧⒅毕涤H屬有糖尿病、流產、滯胎或畸胎）24~28周，口服50g測定1h血糖>7.0mmol/L，OGTT：100g，3h。,乳糖耐量試驗（galactose tolerance test）,目的：評價乳糖的不耐受性方法：同OGTT判斷標準：比空腹血糖高出1.7mmol/L為正常；低于1.1mmol/L可能為乳糖酶缺乏癥。,血

17、清糖化血紅蛋白測定,血紅蛋白的種類：HbA，HbA1、HbA2和HbF，其中HbA1 又包括HbA1a、HbA1b和HbA1c。 HbA1a又分為 HbA1a1和 HbA1a2。紅細胞內的Hb緩慢與糖類結合形成糖化血紅蛋白（glycosylated-hemoglobin，GHb），該過程是不可逆的。,糖化血紅蛋白的形成：,HbA1c的B鏈N-末端纈氨酸氨基與葡萄糖醛基通過非酶促反應而連接； HbA1a1和的N-末端可連接1，6-二磷酸

18、果糖；HbA1a2可與葡萄糖6-磷酸連接；Hb與糖結合的形成過程稱為糖基化作用， GHb是HbA1c的合成后化學修飾的結果。,GHb的形成,GHb的形成取決于血糖濃度及血糖與Hb的接觸時間，其生成量與血糖濃度成正比。其濃度可反映測定前1~2個月受試者的血糖平均水平，而與血糖的短期波動無關。,GHb的測定方法,層析法、電泳法、比色法和RIA法等。目前推薦的常規(guī)方法是親和層析法和控制溫度的離子交換層析微柱法，HPLC列為參考方法。,GHb

19、的測定方法,離子交換層析微柱法：Bio-Rex70陽離子交換樹脂帶有負電荷，與標本中帶有正電荷的HbA和HbA1有親和力，由于HbA1的兩個B鏈N末端正電荷被糖基清除，正電荷比HbA少，二者對樹脂的親和力不同，用適當?shù)碾x子強度和pH的緩沖液先將帶正電荷較少、吸附力較弱的HbA1的洗脫下來，用分光光度計測定。,離子交換層析微柱法：,特點：簡單快速，15min可完成。 微柱可重復使用。 不精密度在2

20、%~16%之間。 應控制標本量和分離時的溫度。 HbF可引起正干擾。 有準確的pH和離子強度的緩沖液和優(yōu)質樹脂,GHb的測定方法,瓊脂糖凝膠電泳：快速準確分離和定量GHb，防止微柱分離法出現(xiàn)的問題，但HbF的遷移率與HbA1相同，產生正干擾。RIA法：靈敏、特異，準確度高，但抗體制備較難，試劑昂貴，需專門儀器。,GHb的測定方法,化學法：可用于自動化分析，結果用果糖或5-羥甲基糠甲

21、醛（5-HMF）校準，不受非糖化血紅蛋白和不穩(wěn)定血紅蛋白中間產物的影響。但費用高，標本用量大，CV為4%~18%。,GHb測定的臨床意義,糖尿病患者GHb含量與空腹血糖和病程成正相關。作為糖尿病長期控制的良好指標，反映測定前1~2個月內血糖的平均水平。鑒別糖尿病高血糖和應激性高血糖，前者GHb水平升高，而后者正常。,血清糖化白蛋白測定,血清中的各種蛋白質與葡萄糖發(fā)生糖基化反應（生成酮胺化合物），其產物稱為糖化血清蛋白（Glucosy

22、lated serum protein-GSP），主要與白蛋白結合，所以GSP又可稱為糖化白蛋白，其結構類似于果糖胺，GSP測定又稱為果糖胺測定。,血清糖化白蛋白測定方法,比色法：糖化蛋白質中的酮胺與弱酸共熱，轉變?yōu)?-羥甲基糖酐，再與硫代巴比妥酸顯色，在445nm處比色測定，靈敏度和特異度較差。親和層析法：選擇性結合糖化衍生物，洗脫分離糖化蛋白質，用溴甲酚綠法測定微量白蛋白，誤差較大。,血清糖化白蛋白測定方法,免疫化學法：免疫電泳（

23、能準確定量，但難以大批量測定）和免疫比濁法（放射免疫比濁和激光免疫比濁，對設備要求較高。果糖胺法：利用果糖胺中的酮胺基能還原四氮唑藍（NBT），生成紫紅色化合物，在530nm處有作大吸收峰。易進行自動化，不受溶血、脂血和黃疸的干擾。但應注意標準化。,血清糖化白蛋白測定的臨床意義,用于糖尿病的篩選：與空腹血糖呈明顯的正相關，且不受飲食的影響。用于糖尿病近期療效的監(jiān)測指標，測定結果可有效反映糖尿病患者過去1~2周的平均血糖水平。用于妊

24、娠糖尿病與孕期高血糖的鑒別。糖尿病并發(fā)癥的預測和防治。,胰島素測定和胰島素釋放試驗,胰島素測定用于了解胰島B細胞的合成和分泌功能，在肝、腎組織中滅活，受血糖濃度調控，檢查胰島素分泌功能用于診斷1型糖尿病。胰島素釋放試驗：反映胰島B細胞的儲備能力，與OGTT方法相同。,胰島素測定方法和臨床意義,胰島素測定方法RIA、時間分辨熒光法和化學發(fā)光免疫比濁法臨床意義1型糖尿病，無論空腹或餐后，胰島素水平均明顯降低。進餐后呈低平曲線。長期

25、使用胰島素可產生胰島素抗體，應進一步測定C肽和胰島素抗體。2型糖尿病，空腹胰島素正常或略高于正常，但餐后胰島素釋放遲緩，，其峰值多延至1.5h以后，比正常人晚1h以上。肥胖、肝腎疾病或排泄受阻時胰島素增高。,C-肽測定,C-肽是胰島素產生過程中分離出來的產物，與胰島素以等摩爾從B細胞釋放，其半衰期-11min）比胰島素長（4.8min），且不被肝臟破壞，只經腎臟代謝，尤其對胰島素治療的病人，更能準確反映胰島功能。甲苯磺丁脲可決定是否

26、用胰島素。5min以后超過20.4微克/L不用；低于1.9微克/L則用胰島素治療。,C-肽測定臨床意義,用于糖尿病的分型：1型糖尿病C-肽減少或測不出；2型糖尿病正?；蚱?，但高峰遲緩。判斷胰島功能。長期接受胰島素治療，產生抗體，C-肽不受影響，了解胰島的功能。鑒別內源性和外源性低血糖。前者（胰島B細胞瘤）胰島素和C-肽均升高，后者（注射胰島素過量），胰島素升高，而C-肽降低。監(jiān)測胰島切除-升高提示未完全切除或易復發(fā)。,尿糖測定,