人類新的snoRNA的鑒定與功能分析.pdf

1、分子生物學(xué)的根本目的是從微觀角度對紛繁復(fù)雜生物世界作出科學(xué)解釋。五十多年來，圍繞著基因的復(fù)制與表達(dá)這個(gè)分子生物學(xué)的核心課題，研究人員在中心法則的框架下不斷豐富著我們對這一生命基本現(xiàn)象的認(rèn)識。在這一過程很重要的突破是對各種類型的非編碼RNA的鑒定與功能研究。核仁小分子RNA(snoRNA)是目前已鑒定的非編碼RNA中的最大的類群。從古細(xì)菌到哺乳動物的幾乎所有的生物類群中都已鑒定出snoRNA這類分子。目前，研究已經(jīng)證實(shí)這類分子具有參與核糖

2、體RNA的生物合成以及指導(dǎo)包括核糖體RNA，核小分子RNA，轉(zhuǎn)運(yùn)RNA在內(nèi)的一系列RNA分子的轉(zhuǎn)錄后修飾等生物學(xué)功能。另外，在哺乳動物中還鑒定出一百多種功能未知的snoRNA分子(orphan snoRNA)，有證據(jù)顯示這些分子將在其它生理過程中起到重要的調(diào)控功能。因此，對新的saoRNA進(jìn)行鑒定及對其功能進(jìn)行分析對于加深我們對基因的表達(dá)與調(diào)控的認(rèn)識有重要意義。本論文采用計(jì)算機(jī)分析與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，對人類的snoRNA進(jìn)行了

3、研究。 本論文應(yīng)用SnoSeeker軟件包對人類基因組進(jìn)行分析，從中篩選出19種候選SnoRNA分子，這包括11種box C/D snoRNA分子和8種box H/ACA snoRNA分子。本論文對這19種snoRNA分子進(jìn)行了功能分析，結(jié)果指出其中分別有6種box C/D snoRNA和5種box H/ACA snoRNA也許具有指導(dǎo)核糖體RNA和核小分子RNA轉(zhuǎn)錄后修飾的生物學(xué)功能。另外的8種snoRNA則屬于功能尚未能確定

4、的類群。本論文以northern雜交，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和cDNA測序等實(shí)驗(yàn)方法對這19種候選snoRNA分子在Hela細(xì)胞的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。結(jié)果確定了六種在Hela細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)snoRNA，分別命名為SNORD119，SNORD124，SNORA82，SNORA83．SNORA85和SNORA86。它們屬于人類細(xì)胞中新鑒定的snoRNA分子。在這六種分子中，SNORD119的功能是指導(dǎo)28S-A4560堿基的2’-O-核糖甲基化修飾：S

5、NORA82和SNORA83則分別指導(dǎo)28S-449l和18S-1367位點(diǎn)的假尿嘧啶化修飾：其余三種是新的orphan snoRNA。 本論文還對表現(xiàn)出組織專一性的SNORD121分子的生物學(xué)功能進(jìn)行了研究。結(jié)果指出，該分子序列中有一段長度為12個(gè)核苷酸與28S核糖體RNA互補(bǔ)的反義序列，預(yù)測它可以指導(dǎo)28S-G4607位點(diǎn)的2’-O-核糖甲基化修飾。但dNTP濃度梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該位點(diǎn)的修飾并沒有組織專一性。這說明該分子也許