南極磷蝦反式EPA及DHA抗腫瘤作用的研究.pdf

1、南極磷蝦因其巨大的生物量及高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值（如油脂和蛋白質(zhì)），引起了各國(guó)的廣泛關(guān)注。南極磷蝦油因富含ω-3多不飽和脂肪酸、磷脂及蝦青素等活性成分，已經(jīng)作為保健食品成功應(yīng)用于降血壓血脂、保護(hù)心腦血管、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等領(lǐng)域。本課題組的前期研究表明，南極磷蝦油具備一定的體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，但是作為一種成分復(fù)雜的混合物，其發(fā)揮體外抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)至今仍不明確，而且其中具有抗腫瘤活性物質(zhì)的作用機(jī)理也有待于進(jìn)一步深入研究。針對(duì)以上問(wèn)題，本論

2、文主要內(nèi)容如下:
　　(1)南極磷蝦油中抗腫瘤活性物質(zhì)的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定。利用溶劑萃取、硅膠層析及高效制備液相色譜等方法，從南極磷蝦油中分離純化得到兩種具備抗腫瘤活性的物質(zhì)，并通過(guò)LC-MS，F(xiàn)TIR，HRESIMS，1H-NMR，13C-NMR和激光散射拉曼光譜等技術(shù)確定其為反式的二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)。
　　(2)考察了南極磷蝦反式EPA及DHA對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)果表明，南極磷蝦

3、反式EPA/DHA對(duì)HL60、U937、K562、MCF-7、MDA-MB-231、PC-3及SMMC-7721七種不同類(lèi)型腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制活性比其它三種順式EPA/DHA（來(lái)自市售魚(yú)油、阿穆?tīng)桏\魚(yú)肝油及標(biāo)準(zhǔn)品）強(qiáng)3-7倍。以MCF-7為例，南極磷蝦EPA的IC50值為14.01μM，而其他三種來(lái)源EPA的IC50值分別為81.45、82.11及80.51μM;南極磷蝦DHA的IC50值為19.94μM，而其他來(lái)源DHA的IC50值分

4、別為73.13、75.31及70.13μM。另外，南極磷蝦反式EPA及DHA對(duì)人正常肝細(xì)胞HL7702的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。
　　(3)考察了南極磷蝦反式EPA及DHA誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。結(jié)果表明，不同藥物濃度處理MCF-7細(xì)胞后，ROS水平隨藥物濃度的增加而升高;隨著處理時(shí)間的增加，ROS水平先升高后降低。與順式EPA及DHA標(biāo)準(zhǔn)品相比，南極磷蝦EPA及DHA可誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的ROS，而且也可以顯著降低細(xì)胞的T-AOC、

5、GSH及T-SOD水平;南極磷蝦EPA及DHA對(duì)人正常肝細(xì)胞HL7702的ROS水平無(wú)顯著影響。
　　(4)考察了南極磷蝦反式EPA及DHA影響MCF-7的遷移及侵襲的作用機(jī)制。結(jié)果表明，南極磷蝦反式EPA對(duì)MCF-7的遷移及侵襲能力幾乎無(wú)影響，而南極磷蝦反式DHA可顯著下調(diào)MCF-7的遷移及侵襲能力;同時(shí)在MCF-7/CD95i細(xì)胞中，南極磷蝦DHA也可以下調(diào)MCF-7/CD95i的遷移及侵襲能力，但下調(diào)效果明顯減弱。隨著DHA

6、濃度的增加，在MCF-7細(xì)胞中CD95與Caveolin-1的相互作用也隨之增強(qiáng)，而且CD95與Caveolin-1的相互作用增強(qiáng)會(huì)抑制FAK/Src/PI3K/Akt信號(hào)通路，并最終使MMP2的表達(dá)下調(diào)，從而抑制細(xì)胞的遷移及侵襲。
　　綜上所述，本研究明確了南極磷蝦油中抗腫瘤活性的物質(zhì)為反式的EPA及DHA，進(jìn)一步探究了其誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡和影響MCF-7的遷移及侵襲的作用機(jī)制，這些研究結(jié)果有利于深入揭示南極磷蝦油的營(yíng)養(yǎng)和藥