復(fù)方中草藥對吉富羅非魚免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗以健康的吉富羅非魚為試驗動物,研究在羅非魚基礎(chǔ)飼料中添加不同劑量的復(fù)方中草藥對其免疫相關(guān)基因表達(dá)量的影響,確定復(fù)方中草藥的添加劑量,以初步探討復(fù)方中草藥對吉富羅非魚的作用機理。
　　 選用健康、規(guī)格整齊的吉富羅非魚(體重19.62±0.06 g)隨機分為5組,按科學(xué)的飼養(yǎng)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理。對照組投喂基礎(chǔ)飼料,0.5組、1.0組、1.5組和2.0組為試驗組分別投喂添加0.5％,1％,1.5％和2％復(fù)方中草藥的飼料,復(fù)方中草藥

2、是由黃芪、當(dāng)歸、甘草和山植等6種中草藥按一定比例配比制備成。養(yǎng)殖試驗共進(jìn)行28天。在投喂后的第7天、第14天、第21天和第28天,分別提取試驗組和對照組的肝臟、鰓、胸腺、頭腎和脾臟5種組織中的總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,利用Real-timePCR方法對不同組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和熱應(yīng)激蛋白70基因(Hsp70)等3種免疫相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析。養(yǎng)殖實驗結(jié)束,用1×108cfu/mL嗜水氣單胞菌攻毒

3、,測定復(fù)方中草藥對羅非魚抗病力的影響。
　　 結(jié)果表明:添加一定劑量的復(fù)方中草藥能誘導(dǎo)吉富羅非魚Hsp70、TNF-α和IL-1β基因在頭腎、肝臟、胸腺、鰓和脾臟5種組織中表達(dá)。在第7天,1.5劑量組和2.0劑量組在脾臟、頭腎、鰓和胸腺組織中IL-1β基因表達(dá)量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在第14天,1.0劑量組在鰓中IL-1β基因的表達(dá)量顯著高于同期對照組(P<0.05)并達(dá)到峰值。在第28天,0.5劑量組在脾臟和鰓中

4、IL-1β基因表達(dá)量達(dá)到最大量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在頭腎組織中,各個劑量組吉富羅非魚IL-1β基因表達(dá)量顯著高于同期對照組(P<0.05)。
　　 在第7天時,2.0劑量組在頭腎、脾臟和胸腺組織中TNF-α基因表達(dá)量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在第28天時,0.5劑量組在脾臟、肝臟、胸腺和頭腎組織中TNF-α基因表達(dá)量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在整個試驗階段,1.0劑量組在在脾臟中TNF-α基因

5、表達(dá)量均顯著高于同期對照組(P<0.05),并在第14天時TNF-α基因表達(dá)量達(dá)到峰值。在整個試驗期間,1.5劑量組在胸腺、脾臟和頭腎中TNF-α基因表達(dá)量均顯著高于同期對照組(P<0.05)。
　　 在投喂第7天后,1.5劑量組和2.0劑量組在胸腺、鰓、頭腎和脾臟中Hsp70基因表達(dá)量顯著性高于同期對照組(P<0.05)。在第28天,0.5劑量組在脾臟、胸腺、肝臟、鰓和頭腎組織中Hsp70基因表達(dá)量均顯著高于同期對照組(P<0

6、.05)。在第28天,1.0劑量組在胸腺中Hsp70基因表達(dá)量達(dá)到最大量顯著高于同期對照組(P<0.05)。1.0劑量組在整個實驗的各個階段肝臟組織中Hsp70基因表達(dá)量與同期對照組無顯著性差異(P>0.05)；相對免疫保護(hù)率以2.0劑量組(61.6％)最高,次之是1.5劑量組的(53.8％)。
　　 本復(fù)方中草藥可以提高吉富羅非魚肝臟、鰓、胸腺、頭腎和脾臟5種組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和熱應(yīng)激蛋白