五種柑橘真菌性病害病原鑒定.pdf

1、本論文于2009年至2011年期間進(jìn)行，針對(duì)全國(guó)多處柑橘產(chǎn)區(qū)的專家和農(nóng)戶反映的柑橘生長(zhǎng)期病害展開研究。這些病因不明確的病害，正嚴(yán)重威脅著我國(guó)的柑橘產(chǎn)業(yè)。
　　 本研究在田間調(diào)查和研究的基礎(chǔ)上，開展了果園跟蹤觀察，分離培養(yǎng)，致病性試驗(yàn)，病原菌的形態(tài)學(xué)和培養(yǎng)性狀觀察，并結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)五種柑橘真菌性病害的病原菌進(jìn)行了鑒定，研究了部分病原菌的生物學(xué)特性和離體條件下的有效藥劑。病原性質(zhì)的確定為病害的有效控制奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)將本研究的結(jié)

2、果總結(jié)如下。
　　 1.柑橘輪斑病病原菌研究:自2006年或更早，陜西城固溫州蜜柑（Citrusunshiu Marcov.）及金橘(Fortunella margarita(Lour.) Swingle）上發(fā)生一種國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道過的毀滅性病害——輪斑病，已引起巨大經(jīng)濟(jì)損失。該病害只在晚冬和早春的時(shí)候流行。通過普通組織分離和毛細(xì)管單孢分離法，從受害葉片、嫩梢和枝干上分離得到擬隱殼孢屬的一種真菌。通過在溫州蜜柑的葉片上接種該菌的分

3、生孢子懸浮液，完成科赫氏法則。基于LSU構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，顯示該病原菌屬于擬隱殼孢屬（有性型:明孢盤菌屬，皮生科）;分別基于ITS、SSU、TUB構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，顯示分離得到的病原菌菌株單獨(dú)聚成一個(gè)分枝。通過形態(tài)學(xué)的進(jìn)一步鑒定，病原菌與擬隱殼孢屬已報(bào)道的真菌都不盡一致，推測(cè)其可能為擬隱殼孢屬的一個(gè)新種。我們將其命名為Cryptosporiopsis citricarpa sp.nov。C.citricarpa在以蔗糖、果糖、麥芽糖、葡萄糖

4、和山梨醇為唯一碳源時(shí)，生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)較好，在乙醇上最差;不能利用尿素，0.2％ wt/vol濃度的尿素甚至具有殺死病菌的能力。C citricarpa在pH為4.0～5.0時(shí)生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)最好。通過室內(nèi)藥劑初步篩選，苯醚甲環(huán)唑和咪鮮胺對(duì)C.citricarpa菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)有較好的抑制作用。
　　 2.柑橘花瓣灰霉病引起的果面?zhèn)芯?本實(shí)驗(yàn)通過終花期掛牌跟蹤、噴藥防治花瓣灰霉病、幼果接種，研究柑橘花瓣灰霉病與果面疤痕的相關(guān)性，并觀察所形

5、成的疤痕特征，同時(shí)明確其灰霉種類。掛牌跟蹤試驗(yàn)結(jié)果表明，柑橘花瓣可受灰霉菌的感染，發(fā)生腐爛，腐爛的花瓣不易脫落，易黏貼在幼果上，花瓣上滋生的灰霉菌可感染幼果表皮，形成凹陷斑點(diǎn)或斑塊，凹陷部位隨后木栓化，呈痘瘡狀或脊?fàn)畹耐蛊?，凸起組織表面呈灰白色或灰褐色，隨著果實(shí)的膨大，凸起部位逐漸變平坦，甚至稍許下陷，表面粗糙（似軟木塞狀，corky scars），大小形狀各異的疤痕。接種試驗(yàn)表明，灰霉菌可以引起幼果表面產(chǎn)生黑色凹陷的斑點(diǎn)或斑塊?；ㄆ趪?/p>

6、施速克靈可以部分降低疤痕果的比例。綜合以上結(jié)果，可以肯定花瓣灰霉腐爛與果實(shí)表面疤痕有關(guān)。通過形態(tài)學(xué)和分子鑒定，證明花瓣上的灰霉菌主要為灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea Pers.Ex.Fr.）。
　　 3.金橘腳腐病病原菌鑒定:金橘是廣西省壯族自治區(qū)桂林市的重要經(jīng)濟(jì)作物，但金橘腳腐病已成為當(dāng)?shù)貒?yán)重的病害。發(fā)病植株樹勢(shì)逐漸衰弱，病斑若圍繞樹干一周，植株便枯死。本實(shí)驗(yàn)通過組織分離法從發(fā)病樹干上不斷分離得到一種真菌，并通過

7、形態(tài)學(xué)特征初步鑒定為柑橘褐腐疫霉（Phytophthora citrophthora）。選擇代表性菌株在金橘幼苗、嫩梢和枝干上進(jìn)行接種，完成致病性測(cè)定。通過擴(kuò)增轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列（ITS）和翻譯延長(zhǎng)因子（TEF-1α），進(jìn)一步確定引起金橘腳腐病的病原為柑橘褐腐疫霉。
　　 4.金橘枝干開裂病原菌鑒定:2008年至2011年，廣西省壯族自治區(qū)桂林市陽朔縣金橘果園內(nèi)大面積發(fā)生枝干開裂現(xiàn)象，且木質(zhì)部變褐，嚴(yán)重影響當(dāng)?shù)刂鳟a(chǎn)業(yè)——古板金橘(F

8、ortunella margarita(Lour.) Swingle) cv.Guban）的產(chǎn)量和品質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)通過連續(xù)3年田間觀察、調(diào)查、采樣和分離，并進(jìn)行室內(nèi)和田間致病性測(cè)定，證明以08YSJG-1和GLB1為代表的兩類鐮刀菌為金橘枝干開裂病的致病菌。通過形態(tài)學(xué)鑒定以及TEF1基因序列測(cè)定，進(jìn)一步確定金橘枝干開裂主要由尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)和滕倉赤霉(Gibberella fujikuroi)復(fù)合種的一個(gè)新

9、種（暫命名F.sp.GLB1）兩種鐮刀菌侵染引起。
　　 5.胡柚脂斑病的病原菌鑒定及病害循環(huán)初步研究:胡柚(Citrus paradisi Mac.cv.Changshanhuyou)是浙江衢州、常山等地區(qū)重要的特色經(jīng)濟(jì)作物，但脂點(diǎn)黃斑病是胡柚生產(chǎn)過程中最主要的病害，引起冬季和早春大量落葉，輕者影響樹勢(shì)，重者可致全株枯死，甚至死樹毀園。本研究從各種癥狀類型的發(fā)病葉片和果實(shí)上分離病菌，通過觀察培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特征、分析分子序列（