表面活性劑對(duì)β-葡萄糖苷酶催化合成紅景天苷的影響.pdf

1、糖苷類(lèi)化合物作為一類(lèi)具有較高生理活性和藥理活性的糖類(lèi)藥物，歷來(lái)都是藥物化學(xué)的一個(gè)研究熱點(diǎn)領(lǐng)域。紅景天苷系糖苷類(lèi)藥物中的一類(lèi)典型化合物，具有抗疲勞、抗衰老等優(yōu)良的藥理活性。目前，被用于藥物使用的紅景天苷主要是從植物中提取獲得，但植物中紅景天苷有效成分含量偏低，遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，這就亟需探索出高效制備紅景天苷的途徑以滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。迄今為止，人工制備獲取紅景天苷的方法有化學(xué)合成法、愈傷組織培養(yǎng)合成、生物催化合成等，其中，生物催化合成以其具有

2、獨(dú)特的高立體、區(qū)域選擇性，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和等特點(diǎn)而受到廣大研究者的親睞。近年來(lái)，介質(zhì)工程研究成為生物催化合成的熱門(mén)領(lǐng)域，尤其圍繞以離子液體作為新型、綠色的反應(yīng)介質(zhì)的酶促反應(yīng)，進(jìn)行了廣泛的探索研究。
　　 研究表明，表面活性劑在酶促反應(yīng)中具有維持酶活性等方面的功效，但表面活性劑對(duì)酶催化反應(yīng)的影響研究主要涉及脂酶，纖維素酶，磷脂酶等酶促反應(yīng)，而在糖苷類(lèi)化合物的催化合成反應(yīng)中的應(yīng)用卻鮮見(jiàn)報(bào)道?；谏鲜鼍売?，本論文在純水相、水-有

3、機(jī)兩相體系反應(yīng)介質(zhì)中分別引入了不同類(lèi)表面活性劑，考察了它們對(duì)β-葡萄糖苷酶活性的影響變化，以及各自反應(yīng)體系中對(duì)酶催化反應(yīng)底物轉(zhuǎn)化率的影響。此外，鑒于非離子表面活性劑吐溫-20(Tween20)表現(xiàn)出優(yōu)良的維持酶活穩(wěn)定性功效，課題制備了吐溫-20-酶復(fù)合物，在水-有機(jī)單相體系中考察了該復(fù)合物酶活性的變化。
　　 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在純水相中，表面活性劑表現(xiàn)出一定的抑制酶失活的作用，其中以吐溫-20的維活效果最為明顯，當(dāng)Tween20的添加

4、濃度為10g/L時(shí)，在50℃下反應(yīng)6天后仍檢測(cè)到高達(dá)79.7％的余酶活量值。非離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和十二烷基磺酸鈉(SDS)表現(xiàn)出的抑制酶失活的作用略低于Tween20。受體系中多種因素的影響，在分別添加有CTAB和Tween20的反應(yīng)組中，底物轉(zhuǎn)化率均提高了1.5倍。
　　 在水-有機(jī)兩相體系中，SDS對(duì)酶的失活體現(xiàn)出最為有效的抑制作用，其余表面活性劑均對(duì)酶失活起了不同程度的加速作用。在幾類(lèi)表面活性劑

5、各自最適添加濃度下，CTAB，SDS，Tween20三組均將底物轉(zhuǎn)化率從9.2％提高到11％左右。不添加表面活性劑所測(cè)得的初始反應(yīng)速率最高，Tween20組次之，離子型表面活性劑添加組最低。對(duì)于SDS添加組，當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)體系中含水量為10％時(shí)，底物轉(zhuǎn)化率可以達(dá)到22.3％。
　　 通過(guò)分離純化，從枯草芽孢桿菌中得到一類(lèi)脂肽表面活性劑。在水相體系中研究了它對(duì)β-葡萄糖苷酶酶活的影響。另以緩沖液-正己烷為反應(yīng)體系，考察了脂肽對(duì)酶催化合