新型電化學(xué)DNA傳感器用于結(jié)核分枝桿菌及其耐藥基因檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、耐藥結(jié)核分枝桿菌，尤其是耐多藥結(jié)核分枝桿菌的出現(xiàn)給結(jié)核病的檢測(cè)和治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)，對(duì)人類健康產(chǎn)生了極大威脅。目前臨床上常用的結(jié)核病的檢測(cè)方法分別存在操作繁瑣、儀器昂貴、耗時(shí)較長(zhǎng)及易污染等不足。電化學(xué)DNA傳感器是近幾年發(fā)展起來的一種新型生物傳感器，因其簡(jiǎn)單、靈敏、特異性強(qiáng)、易微型化等特點(diǎn)受到研究者的青睞，已被應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域的研究。然而電化學(xué)DNA傳感器易受其他因素的干擾造成結(jié)果不穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)前期構(gòu)建的BSA單分子層控制組裝界面為基礎(chǔ)的

2、電化學(xué)DNA傳感器，有效地提高了體系的穩(wěn)定性。本文在前期研究基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一種新型檢測(cè)體系，即用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)的雙通道電化學(xué)DNA傳感器，同時(shí)對(duì)其特異性、靈敏性等性能進(jìn)行了研究。此外，將新型生物傳感器用于結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本耐藥性的檢測(cè)，結(jié)果表明，生物傳感器能夠有效避免其他雜質(zhì)的影響，實(shí)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測(cè)。
　　（一）以BSA單分子層控制組裝界面為基礎(chǔ)，構(gòu)建雙通道電化學(xué)DNA傳感器，用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌耐藥基

3、因的快速檢測(cè)。在組裝界面分別組裝兩套不同的探針序列，識(shí)別不同的目標(biāo)分子，信號(hào)探針標(biāo)記生物素或鏈霉親和素，通過生物素-鏈霉親和素的相互作用在電極表面組裝酶分子，安培法檢測(cè)酶催化相關(guān)氧化還原反應(yīng)，能夠?qū)崿F(xiàn)不同目標(biāo)序列的同時(shí)檢測(cè)。對(duì)雙通道DNA傳感器性能研究，表明該雙通道DNA傳感器具有較好的特異性和靈敏性，能夠區(qū)分單堿基錯(cuò)配序列，對(duì)rpoB，katG，inhA三種耐藥基因的檢測(cè)限分別為4.33×10-12mol/L，3.28×10-12mo

4、l/L，4.02×10-12mol/L。該雙通道生物傳感器不僅具有操作簡(jiǎn)單、低花費(fèi)、靈敏度高、穩(wěn)定性好、易微型化等特點(diǎn)，還能有效縮短檢測(cè)時(shí)間，為結(jié)核病的診治提供快速有效的依據(jù)。
　　（二）新型電化學(xué)DNA傳感器用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床標(biāo)本的檢測(cè)。設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物擴(kuò)增包含常見耐藥基因突變位點(diǎn)的相應(yīng)基因序列，新型電化學(xué)DNA傳感器檢測(cè)體系檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。由于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物處于雙螺旋狀態(tài)，在進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)時(shí)，雜交反應(yīng)之前要進(jìn)行變性過