鎖核酸修飾的電化學(xué)DNA生物傳感器用于檢測急性早幼粒細胞白血病相關(guān)融合基因的實驗研究.pdf

1、因快速、靈敏、微型化和易于操作等優(yōu)點受到了廣泛關(guān)注的新型生物傳感器——電化學(xué)DNA生物傳感器，被認為是開辟電化學(xué)與分子生物學(xué)的交叉學(xué)科，對遺傳工程、醫(yī)藥學(xué)的研究具有深遠的意義和應(yīng)用價值。鎖核酸探針是近年來隨著基因工程技術(shù)發(fā)展起來的一種新探針技術(shù)，具有較強的DNA、RNA識別能力和親和力、較高的熱穩(wěn)定性等特點，已應(yīng)用于基因研究的各個領(lǐng)域以及疾病的診斷和治療中。本研究設(shè)計出一種新型的電化學(xué)探針(鎖核酸)，進而構(gòu)建了一種“三明治”模式的電化學(xué)

2、DNA傳感器，用于檢測急性早幼粒白血病APL的PML/RARα融合基因，并考察了傳感器的特異性、穩(wěn)定性等性能。
　　 ㈠將鎖核酸探針技術(shù)與電化學(xué)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)相結(jié)合構(gòu)建了鎖核酸修飾的“三明治”模式電化學(xué)DNA生物傳感器對目的基因進行檢測，以雜交前后電流的變化作為指示信號。結(jié)果表明：在優(yōu)化雜交條件下，該傳感器可在1.0×10-13～1.0×10-11mol/L DNA濃度范圍內(nèi)定量測定人工合成的PML/RARα融合基因，且互補鏈

3、濃度與該傳感器的檢測電流信號成良好的線性關(guān)系，檢測限為7.4×10-14mol/L。對雜交溶液中的完全互補序列與不同錯配序列能較好區(qū)分，對單純雜交體系中人工合成的PML/RARα融合基因定性定量測定結(jié)果較為理想。
　　 ㈡將不同種類的錯配序列混合作為干擾背景，對“三明治”模式電化學(xué)DNA生物傳感器的特異性和靈敏度進行進一步的考察。結(jié)果表明，在最佳條件下，該電化學(xué)DNA生物傳感器測定混合干擾體系中人工合成的PML/RARα融合基因