滸苔多糖對小鼠腸道菌群及腸道屏障的修復作用.pdf

1、順鉑(DDP)等多種化療中使用的藥物常伴隨腹瀉、嘔吐等胃腸副反應，嚴重限制其在臨床的使用。多項研究初步證明，順鉑能夠造成腸道多種屏障的損傷及紊亂。目前研究顯示，腸道屏障為腸道菌群提供微環(huán)境基礎，腸道菌群中的生理性細菌又構成腸道的生物屏障。腸屏障與腸道微生物組之間存在重重聯(lián)系，我們前期實驗發(fā)現(xiàn)順鉑能夠導致腸道中微生物組的失衡。如果能夠建立順鉑造成的腸道屏障損傷及腸道菌群失衡之間的聯(lián)系，將為臨床改善順鉑導致的腸道副作用提供理論依據(jù)。滸苔是我

2、國東部沿海居民經常食用的綠藻，我們前期的實驗發(fā)現(xiàn)滸苔及滸苔多糖能夠有效調節(jié)便秘小鼠腸道菌群多樣性，進而改善便秘。
　　基于以上背景及前期實驗基礎，我們對小鼠進行不同時間的順鉑處理，探究順鉑導致的腸道屏障損傷及腸道菌群的紊亂之間的聯(lián)系。其次用滸苔多糖對小鼠進行預處理，探究滸苔多糖能否降低順鉑對腸道菌群及腸道屏障的破壞。
　　目的：
　　首先明確順鉑造成小鼠腸道損傷及腸道菌群紊亂的先后關系，其次對小鼠進行滸苔多糖干預，探究

3、滸苔多糖對順鉑造成的腸道損傷是否有干預作用。
　　方法：
　　1.采用水提法提取滸苔多糖，利用多糖在60％-80％酒精中沉淀的性質將多糖濃縮。2.動物實驗為BALb/c小鼠，雌性，將其隨機分為三組，對照組(No)、順鉑組(DDP)、順鉑及滸苔多糖組(DDP+PEP)。首先對DDP+PEP組進行滸苔多糖干預，1周后，用配制好的順鉑對DDP和DDP+PEP兩組小鼠進行單次腹腔注射，劑量為14mg/kg。一部分DDP組小鼠在0、1

4、2、36及72h各時間點分別處死3只，每個時間點均收集在72h時間點處死的小鼠的糞便，其他小鼠在72h后處死，取血、小腸、小腸腸壁定植菌及糞便進行研究。3.選用TdT介導的dUTP末端標記法對各組小鼠的腸道上皮細胞凋亡進行檢測;對16sDNA片段測序，研究各組小鼠腸道中各種細菌比例的差異;采用H&E染色技術確定腸道出現(xiàn)的病例損傷;采用免疫組化技術對小鼠小腸各個屏障的多項指標進行檢測。最后，將PCR-DGGE及16sDNA測序技術結合，對

5、小腸腸壁定植菌（生物屏障）進行檢測。
　　結果：
　　1.注射順鉑12h后檢測到腸道中細菌比例發(fā)生變化;36h后小腸病理學出現(xiàn)損傷。2.順鉑導致腸內菌群中變形菌門含量大幅增長;腸道機械屏障中上皮細胞大量凋亡;化學屏障中表達黏液蛋白的細胞數(shù)明顯減少;免疫屏障中IgA陽性細胞數(shù)減少;生物屏障中志賀菌屬豐富度增加。3.在滸苔多糖的干預下，腸道菌群紊亂情況明顯減輕，腸道各個屏障的損傷大幅度降低。小腸定植菌中乳酸桿菌明顯增加，致病菌減