染料木素對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖ICR小鼠脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)肥胖發(fā)病率呈現(xiàn)了快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)，環(huán)顧全球，無(wú)論是發(fā)達(dá)國(guó)家、新興發(fā)展中國(guó)家還是赤貧國(guó)家，預(yù)防和治療肥胖已成為亟待解決的公共衛(wèi)生問(wèn)題。脂肪組織對(duì)雌激素高度敏感，人和小鼠脂肪組織均有雌激素受體（Estrogen receptor，ER）ERα和ERβ的表達(dá)，雌激素可通過(guò)雌激素受體參與脂質(zhì)吸收和脂肪生成，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。植物雌激素是一類來(lái)源于植物的化合物，在結(jié)構(gòu)和功能上與雌激素相似，可與體內(nèi)的ER結(jié)合，發(fā)揮雌激素樣作用。研究證實(shí)，植物

2、雌激素可抑制脂肪細(xì)胞的分化與增殖并誘導(dǎo)其凋亡，減輕體重，從而預(yù)防和改善肥胖。Nouredine等提出，以染料木素為代表的植物雌激素（phyto-estrogen）有望能夠預(yù)防和治療肥胖。并且，植物雌激素可改善血脂異常，對(duì)肝臟和心臟具有保護(hù)作用。肝臟作為脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵器官，是雌激素受體的表達(dá)器官之一。然而，植物雌激素調(diào)節(jié)肥胖、改善脂質(zhì)代謝是否與其對(duì)肝臟的功能有關(guān)并沒(méi)有受到足夠的關(guān)注。有研究發(fā)現(xiàn)孕期和幼年動(dòng)物比起成年動(dòng)物對(duì)激素水平更加敏感性

3、，激素水平的微量改變可對(duì)動(dòng)物造成終生的影響。目前，植物雌激素對(duì)孕期和幼年動(dòng)物的影響，尤其是孕期和幼年時(shí)期攝入植物雌激素對(duì)動(dòng)物成年以后的影響鮮有報(bào)道。為了探討孕期及幼年時(shí)期攝入植物雌激素對(duì)肥胖ICR小鼠及其肝臟脂質(zhì)代謝的影響，本研究選取染料木素為代表，從孕期開(kāi)始進(jìn)行染料木素干預(yù)，并以高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖模型，研究從孕期開(kāi)始攝入染料木素對(duì)肥胖及肥胖小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響。此外，本研究進(jìn)一步從分子水平上初步探討了染料木素對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)

4、制。本研究主要內(nèi)容如下：
　　1.研究從孕期開(kāi)始進(jìn)行染料木素干預(yù)對(duì)肥胖的影響
　　大豆植物雌激素（主要是染料木素）是具有植物雌激素生物活性的異黃酮，尤其在黃豆及其制品中含量豐富，約為0.2～1.5mg/g。根據(jù)中國(guó)居民膳食寶塔中大豆及豆制品推薦攝入量，進(jìn)行人與小鼠劑量換算，并借鑒參考文獻(xiàn)及本實(shí)驗(yàn)室的前期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，本研究將染料木素的灌胃劑量定為25mg/kg（按體質(zhì)量計(jì)）。本研究以高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖ICR小鼠模型，從孕期開(kāi)始

5、至斷奶前的幼年時(shí)期為分界點(diǎn)進(jìn)行染料木素灌胃，檢測(cè)體重及脂肪指數(shù)、心臟指數(shù)，同時(shí)HE染色的方法觀察脂肪組織和心臟組織細(xì)胞形態(tài)變化，研究染料木素對(duì)肥胖及肥胖小鼠心臟的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，染料木素能減少高脂飲食引起的脂質(zhì)積累，減輕小鼠體重；且與在幼年以后的時(shí)期攝入染料木素的作用相比，從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期攝入染料木素對(duì)小鼠體重的減輕和脂質(zhì)積累的減少更顯著。提示，從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期攝入染料木素可能對(duì)小鼠肥胖具有更顯著的預(yù)防和治療

6、作用。脂肪組織的HE染色結(jié)果提示，染料木素對(duì)高脂飲食引起的脂質(zhì)積累減少和小鼠體重的減輕與其對(duì)脂肪細(xì)胞的影響有關(guān)。此外，在本實(shí)驗(yàn)中，肥胖尚未引起心臟病變，原因可能是肥胖程度和肥胖時(shí)間的有關(guān)，因此在本實(shí)驗(yàn)尚不能夠確定染料木素對(duì)心臟是否具有保護(hù)作用。結(jié)論：染料木素干預(yù)能夠減少高脂飲食引起的脂質(zhì)積累、減輕體重，可用于預(yù)防和治療肥胖，且從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期灌胃染料木素產(chǎn)生的作用更顯著。
　　2.研究從孕期開(kāi)始進(jìn)行染料木素干預(yù)對(duì)肥胖小

7、鼠肝臟的保護(hù)作用
　　脂肪的堆積會(huì)引起機(jī)體內(nèi)一系列的生理功能的改變，肥胖與肝臟功能紊亂密切相關(guān)。本研究以高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖 ICR小鼠模型，同時(shí)以從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期為分界點(diǎn)進(jìn)行染料木素灌胃，檢測(cè)肝臟指數(shù)，并以HE染色的方法觀察肝臟組織形態(tài)，同時(shí)檢測(cè)肝臟組織中的脂質(zhì)含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與肥胖模型組相比，染料木素干預(yù)的小鼠肝臟指數(shù)增加，且從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期的雌性小鼠進(jìn)行染料木素干預(yù)引起肝臟指數(shù)增加的差異顯著。肝臟組織

8、HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，染料木素干預(yù)能減少肝臟組織中的脂滴空泡，減輕高脂飲食引起的肝臟脂肪變。肝臟組織脂質(zhì)含量結(jié)果顯示，染料木素干預(yù)能夠減少肝臟組織中的TG、TC含量。HE結(jié)果和肝臟組織脂質(zhì)含量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同時(shí)間點(diǎn)攝入染料木素后，小鼠肝臟組織形態(tài)和脂質(zhì)含量的組間差異不顯著，提示從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期與幼年以后時(shí)期攝入染料木素均有肝臟保護(hù)作用，沒(méi)有顯著性差異。結(jié)論：從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期與幼年以后時(shí)期給予染料木素，能夠減輕高脂飲食引

9、起的小鼠肝臟脂肪變，保護(hù)肝臟，且從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期與幼年以后時(shí)期攝入染料木素發(fā)揮的肝臟保護(hù)作用可能差別不大。
　　3.研究從孕期開(kāi)始進(jìn)行染料木素干預(yù)對(duì)肥胖小鼠脂質(zhì)代謝的影響并初步探討其作用機(jī)制
　　肥胖常常伴隨有脂質(zhì)代謝紊亂，而染料木素能改善脂質(zhì)代謝的異常，同時(shí)，染料木素調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用機(jī)制也受到了廣泛的關(guān)注。本研究以高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖ICR小鼠模型，同時(shí)以從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期為分界點(diǎn)進(jìn)行染料木素干預(yù)，

10、測(cè)定小鼠血清中TG、TC、HDL、LDL水平，研究染料木素對(duì)肥胖小鼠脂質(zhì)代謝的影響。同時(shí)應(yīng)用Elisa的方法測(cè)定肝臟組織中脂肪酸合成關(guān)鍵酶FASN的含量，RT-PCR和免疫組化的方法測(cè)定肝臟組織中脂質(zhì)代謝關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子PPARα表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，染料木素干預(yù)能降低血清中TG、LDL水平，提高 HDL水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)肥胖小鼠的脂質(zhì)代謝。Elisa、RT-PCR和免疫組化的結(jié)果顯示，染料木素能顯著減少肝臟組織中FASN的含量，提高PPARα的

11、mRNA和蛋白表達(dá)，分子水平提示染料木素可能是通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟組織中的PPARα表達(dá)與FASN含量調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。結(jié)論：染料木素可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)PPARα表達(dá)與FASN的含量有關(guān)。
　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)以高脂飲食誘導(dǎo)建立ICR小鼠肥胖模型，并以從孕期開(kāi)始至斷奶前的幼年時(shí)期為分界點(diǎn)進(jìn)行染料木素灌胃，檢測(cè)小鼠體重、脂肪組織、肝臟組織和心臟組織的臟器指數(shù)，觀察組織形態(tài)，并以Elisa、RT-PCR、IHC等方法測(cè)定血脂、

12、肝臟組織中脂質(zhì)含量、脂代謝相關(guān)酶與蛋白的含量與表達(dá)，發(fā)現(xiàn)從孕期開(kāi)始的染料木素干預(yù)能夠抑制高脂飲食引起的小鼠體重增加、減少脂質(zhì)積累，減輕肝臟脂肪變，降低血清中TG、LDL水平，提高HDL水平，減少肝臟組織中FASN的含量，提高PPARα的mRNA和蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，染料木素具有肝臟保護(hù)作用，可預(yù)防和治療肥胖，并通過(guò)調(diào)節(jié)PPARα表達(dá)與FASN的含量調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為創(chuàng)建孕期、幼年期的食源性植物雌激素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估平臺(tái)和指導(dǎo)人們的日