長鏈非編碼RNA MEG3對肝內(nèi)膽管癌RBE細(xì)胞耐藥性的影響.pdf

1、目的：
　　探討lncRNA MEG3對肝內(nèi)膽管癌RBE細(xì)胞株耐藥性的影響。
　　方法：
　?。?）構(gòu)建MEG3過表達(dá)質(zhì)粒，通過陽離子復(fù)合物-瞬時轉(zhuǎn)染法，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒于膽管癌RBE細(xì)胞株中，利用共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染結(jié)果；
　?。?）應(yīng)用Real-Time PCR檢測RBE細(xì)胞株中MEG3的表達(dá)情況，以及轉(zhuǎn)染前與轉(zhuǎn)染后RBE細(xì)胞中耐藥相關(guān)基因ABCG2、MRP1表達(dá)量的差異；
　?。?）應(yīng)用Western-Blo

2、t法檢測RBE細(xì)胞中耐藥蛋白ABCG2、MRP1轉(zhuǎn)染前后表達(dá)的不同；
　?。?）MTT法測定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48h后，各個組中加入不同濃度的阿霉素繼續(xù)培養(yǎng)兩天，觀察RBE細(xì)胞對阿霉素藥物敏感性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.共聚焦顯微鏡下觀察，目的質(zhì)粒組（pcDNA-M985）轉(zhuǎn)染效率為（61.3±3.7）％，空載質(zhì)粒組（pcDNA-M98）轉(zhuǎn)染效率為（83.2±2.6）%；空白對照組(MOCK)轉(zhuǎn)染效率為0，表明轉(zhuǎn)染成功，轉(zhuǎn)染

3、效果滿意可以進(jìn)行后續(xù)實驗；
　　2.Real-Time PCR結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染前的MEG3（0.37±0.02）相比，轉(zhuǎn)染后MEG3表達(dá)量顯著上調(diào)，轉(zhuǎn)染后MEG3的相對表達(dá)量為（6.23±0.01）；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，與MOCK組（ABCG2，1.09±0.01；MRP1，1.07±0.02）相比，pcDNA-M985組耐藥基因ABCG2、MRP1表達(dá)量顯著降低（ABCG2，0.55±0.01；MRP1，0.27±0.02），其差異具有

4、統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）(圖3-1、3-2)，而pcDNA-M98組（ABCG2，1.03±0.04；MRP1，1.05±0.01）與MOCK組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)；
　　3.Western-Blot結(jié)果顯示，與MOCK組（ABCG2灰度值為329±3.91；MRP1灰度值426±2.80）相比，轉(zhuǎn)染MEG3后pcDNA-M985組耐藥相關(guān)蛋白ABCG2、MRP1蛋白表達(dá)量顯著降低（ABCG2灰度值為191±2

5、.13；MRP1灰度值為29±1.47），其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而pcDNA-M98組（ABCG2灰度值為410±3.96；MRP1灰度值為382±4.28）與MOCK組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4.利用MTT法檢測不同濃度的阿霉素對不同組別細(xì)胞生長抑制率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿霉素對細(xì)胞的生長抑制效應(yīng)呈劑量依賴性：隨著阿霉素濃度的增加，對細(xì)胞的生長抑制作用越強(qiáng)，并且在0.5g/L時，其對各組細(xì)胞均有

6、較強(qiáng)的抑制作用。與MOCK組生長抑制率（43.15±3.67）％相比，pcDNA-M985組生長抑制率顯著增高為（61.97±6.14）％，其差異顯著性明顯(P＜0.01），而 pcDNA-M98組抑制率（45.83±4.37）％與MOCK組相比，差異無顯著性（P＞0.05），進(jìn)一步證實過表達(dá)MEG3不僅抑制 ABCG2、MRP1基因及蛋白表達(dá)，也提高了RBE細(xì)胞的藥物敏感性，進(jìn)一步降低了腫瘤細(xì)胞的耐藥作用。
　　結(jié)論：