降糖三黃片干預(yù)2型糖尿病大鼠糖脂代謝AMPK通路的實驗研究.pdf

1、文獻(xiàn)研究:
　　雖然2型糖尿病(T2DM)的發(fā)病機(jī)制仍然屬于科研探索的重點難點，但是糖脂代謝紊亂帶來的糖、脂毒性和胰島素抵抗(IR)在以T2DM為代表的多種代謝性疾病的病理發(fā)生過程中扮演著重要角色已為學(xué)界熟識。目前研究認(rèn)為，糖脂代謝紊亂的發(fā)生機(jī)制與氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)、細(xì)胞自噬等因素均關(guān)系密切，且涉及多條交叉影響的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路作為其中的一部分，由于其自身對細(xì)胞能量變化的敏感性以及可介導(dǎo)多條糖脂

2、代謝相關(guān)信號通路的特點，而受到廣泛關(guān)注。隨著研究的進(jìn)行，已經(jīng)有許多干預(yù)措施包括飲食運(yùn)動，藥物以及天然提取物被證實可以通過調(diào)節(jié)AMPK通路改善T2DM的糖脂代謝紊亂。結(jié)合臨床表現(xiàn)與當(dāng)代醫(yī)家認(rèn)識，T2DM糖脂代謝紊亂可歸屬于中醫(yī)肥胖、脾癉、消渴、膏濁以及消癉等疾病。本病病因一般歸結(jié)于飲食不當(dāng)、精神心理不良刺激以及缺乏運(yùn)動等三個方面，病機(jī)為本虛標(biāo)實，虛實夾雜，本虛主要涉及肝脾腎三臟，標(biāo)實以痰濁、瘀血為主。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對糖脂代謝異常疾病的認(rèn)識，

3、當(dāng)代中醫(yī)學(xué)者在傳統(tǒng)理論的基礎(chǔ)上，提出許多行之有效的特色辨治思路，值得我們總結(jié)學(xué)習(xí)。在這些特色理論與治法中，廣州中醫(yī)藥大學(xué)傷寒學(xué)團(tuán)隊開發(fā)的降糖三黃片獨樹一幟，對糖尿病及其并發(fā)癥的治療具有扎實的科研基礎(chǔ)與良好的臨床療效。
　　實驗研究:
　　目的:
　　構(gòu)建T2DM大鼠模型，觀察降糖三黃片對模型大鼠糖脂代謝水平，胰島素抵抗程度，肝組織病理改變以及肝臟AMPK、PGC-1α蛋白與基因表達(dá)的影響，以明確降糖三黃片改善T2DM大

4、鼠糖脂代謝紊亂的機(jī)制，為降糖三黃片的臨床運(yùn)用提供現(xiàn)代生物學(xué)方面的理論支持。
　　方法:
　　70只SPF級SD雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。以簡單隨機(jī)法抽取空白對照組10只，普食喂養(yǎng)，其余60只高糖高脂飲食喂養(yǎng)1個月。高糖高脂處理的大鼠按35 mg/kg一次性腹腔注射STZ，普食大鼠注射等量檸檬酸緩沖液。72h后測血糖，若空腹血糖≥11.1 mmol/L，同時伴多飲、多尿等癥狀，且2周后復(fù)測穩(wěn)定在11.1 mmol幾以上者確認(rèn)為2

5、型糖尿病模型。利用隨機(jī)數(shù)字表將成模鼠分為模型組，降糖三黃片低劑量組、降糖三黃片高劑量組與二甲雙胍組。降糖三黃片高、低劑量組分別予藥1.563 g/kg與0.781 g/kg每日;二甲雙胍組按0.156 g/kg·d給藥;空白對照組與模型組灌服等容量飲用水。8周療程后，通過實驗的大鼠包括空白對照組10只，模型組8只，低劑量組9只，高劑量組8只及二甲雙胍組9只。實驗期間分別于治療前、治療四周及八周末監(jiān)測各組大鼠體重、飲水量、進(jìn)食量和空腹血糖

6、。于治療八周后檢測血脂(TC、TG、LDL-C及HDL-C)，血清胰島素等指標(biāo)。取大鼠肝臟標(biāo)本，用HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)改變。用Western blotting法檢測AMPK、pAMPK指標(biāo)。用熒光定量PCR法檢測AMPK、PGC-1α指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　1.對糖脂代謝的改善作用。治療8周后，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠體重顯著高于模型組（P＜0.01）;治療4周及8周后，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠

7、飲水量明顯低于模型組（P＜0.01）;治療4周后，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠攝食量顯著低于模型組（P＜0.05），治療8周后，兩中藥組大鼠攝食量與模型組無差別，而二甲雙胍組大鼠攝食量顯著高于模型組(P＜0.05);治療4周及8周后，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠FBG均顯著低于模型組（P＜0.05）;治療結(jié)束后，降糖三黃片高、低劑量組TC、TG、LDL-C水平均顯著低于模型組（P＜0.01或P＜0.05），二甲雙胍組

8、TG、LDL-C水平低于模型組（P＜0.01）;治療結(jié)束后，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠FINS與HOMA-IR水平低于模型組，且有統(tǒng)計意義（P＜0.01）。
　　2.對肝組織病理形態(tài)改變的作用。從肝指數(shù)分析，降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組肝指數(shù)明顯低于模型組（P＜0.01）。從肝臟解剖形態(tài)觀察，模型組大鼠肝臟與空白對照組相比，肥厚圓潤、質(zhì)韌光滑、色淡有斑點;各治療組大鼠肝臟與模型組相比，緣銳體薄、質(zhì)軟色紅、近距離觀

9、察仍有斑點狀。從光鏡下HE染色切片觀察，模型組大鼠肝組織存在不同程度的細(xì)胞脂肪樣變，而降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組肝細(xì)胞脂肪變的程度較輕，范圍較小。
　　3.對肝臟AMPK蛋白表達(dá)及活性的作用。降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠肝臟AMPK及活化pAMPK蛋白的表達(dá)水平均高于模型組，具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4.對肝臟AMPK/PGC-1α通路基因表達(dá)的作用。降糖三黃片高、低劑量組與二甲雙胍組大鼠肝臟AM

10、PK mRNA表達(dá)程度均高于模型組（P＜0.01）;降糖三黃片高劑量組與二甲雙胍組大鼠肝臟PGC-1α mRNA水平低于模型組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而降糖三黃片低劑量組與模型組無顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1.立足圓運(yùn)動理論，認(rèn)為T2DM糖脂代謝紊亂的根本病機(jī)是由于氣運(yùn)失圓，導(dǎo)致痰濁瘀血郁滯內(nèi)生，降糖三黃片通過通滯以運(yùn)陽氣，存津以保陽氣，厚土以實陽氣的方針起到調(diào)節(jié)氣機(jī)升降的作用，深入認(rèn)識本方中醫(yī)學(xué)內(nèi)涵的同時，結(jié)合以

11、往臨床與實驗研究，是探索降糖三黃片用于改善T2DM糖脂代謝紊亂機(jī)制研究的前提條件。
　　2.實驗研究發(fā)現(xiàn)，降糖三黃片具有增加肝臟AMPK表達(dá)與提高其活性的雙重作用，同時可以抑制PGC-1α在肝臟中的過表達(dá)，從而起到降低T2DM大鼠血糖、血脂、胰島素抵抗水平，改善臨床癥狀，延緩肝臟組織病理改變的作用。其機(jī)制可能涉及AMPK/PGC-1α參與的抑制糖異生與增加脂肪酸氧化分解等生化調(diào)控過程。由于樣本量、劑量分配等原因，總和各指標(biāo)結(jié)果，我