白菜同核異質(zhì)雄性不育系與其保持系生物學差異比較及相關(guān)差異表達基因克隆.pdf

1、浙江大學農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學院博士學位論文白菜同核異質(zhì)雄性不育系與其保持系生物學差異比較及相關(guān)差異表達基因克隆姓名：向珣申請學位級別：博士專業(yè)：蔬菜學指導(dǎo)教師：曹家樹20080112摘要受同核異質(zhì)的影響但趨勢一致。將差異片段回收、克隆、測序，獲得9個eDNA差異片段，在GenBank數(shù)據(jù)庫進行同源序列比對和功能預(yù)測。(5)運用eDNAoAFLP篩選得到G早、中期花蕾提早表達的MYB1ike差異片段，利用RACE克隆得到該片段的eDNA全長，

2、命名為BcMYBogu(GenBank登錄號：EFl27861)，對其氨基酸序列和表達特征進行研究。結(jié)果表tlJ]BcMYBogu具有典型的MYBDNA結(jié)合域—w殘基和SH[AL】QKY[RF】基序；系統(tǒng)進化分析顯示BcMYBogu與AtMYB26AtMYB32和AtMYB4等聚類在同一分支；RTPCR分析表明BcMYBogu在蓮座葉、花莖和花蕾中均有表達，但在G花蕾中表達量顯著上升。B的類黃酮含量隨著花蕾的發(fā)育而增加，而G早期花蕾類黃

3、酮含量較B低，且隨花蕾的發(fā)育呈現(xiàn)下降趨勢，RTPCR分析表明，花蕾中參與調(diào)控苯丙烷代謝途徑9個關(guān)鍵酶(尉￡2，OMTl、4CL3，CHS，F(xiàn)3H，丹W、FLSl，DFR，ANS)的表達模式發(fā)生變化，由此推測BcMYBogu是一個新的與白菜OguraCMS相關(guān)的IvlYB家族新成員，白色花藥可能與絨氈層細胞苯丙烷代謝途徑有關(guān)。(6)采用cDNAAFLP分析，發(fā)現(xiàn)一個在B早期花蕾不表達但在G花蕾中穩(wěn)定表達的差異片段。利用RACE技術(shù)獲得其e

4、DNA全長，命名為BcBHLHogu(GenBank登錄號：EFl27860)。該基因編碼122個氨基酸，具有basichelix100phelix(bHLH)結(jié)構(gòu)域；進化分析表明，BcBHLHogu與AtBHLH060同源性最高，是冗余基因AtBHLHs060／048的直系同源基因，其功能與BEEsl／2／3(三個BR信號的早期應(yīng)答冗余基因)相似。同時G雄蕊花絲顯著變短、雌蕊變長、花藥不開裂，花蕾發(fā)育過程中G的JA含量顯著低于B，由此

5、推導(dǎo)BcBHLHogu是白菜bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族的一個新成員，涉及到花器官發(fā)育信號事件，其功能與BR應(yīng)答有關(guān)。(7)利用cDNAAFLP分析獲得在P晚期花蕾中特異表達的差異片段pA9T4。該片段與甘藍BoTMT2高度同源。擴增得其cDNA和基因全長，命名為BcTMTp(GenBank登錄號：EFl27862)，編碼227個氨基酸，推測其分子量為2517kDa。BcTMTp含有典型的轉(zhuǎn)甲基酶motifI、Ⅱ和III，含有7個內(nèi)含子和8個外

6、顯子。內(nèi)源激素測定結(jié)果表明，P中到晚期花蕾的發(fā)育過程中，LAA含量呈顯著的上升趨勢；P花蕾JA含量極低，且中到晚期花蕾JA含量呈下降趨勢，IAAIJA的比值也存在差異。由此推定，BcTMTp的表達可能與P花蕾中JA和IAA兩種激素信號的互作有關(guān)。是否如此，尚待進一步研究確認。關(guān)鍵詞：白菜：Brassicacampestris；Arapa；同核異質(zhì)；CMS：花蕾：激素；苯丙烷代謝；小孢子發(fā)生；差異表達；cDNAAFLP：基因；克??；特征分