腎陽虛對(duì)肺主氣功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:本研究立足肺腎相關(guān)理論，以肌注氫化可的松建立的腎陽虛大鼠模型為研究平臺(tái)，觀察腎陽虛對(duì)模型大鼠“肺主氣”的影響，以模型大鼠的呼吸指標(biāo)探討腎陽虛對(duì)“肺司呼吸”的影響，以AngⅡ、AT1R等指標(biāo)探討腎陽虛對(duì)“肺朝百脈”的影響，以AQP3、AQP4等指標(biāo)探討腎陽虛對(duì)“肺主通調(diào)水道”的影響，以TLR4、TRAF-6等指標(biāo)探討腎陽虛對(duì)“肺主衛(wèi)外”的影響。同時(shí)運(yùn)用溫補(bǔ)腎陽的右歸丸對(duì)模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，運(yùn)用現(xiàn)代研究手段檢測(cè)其肺內(nèi)各種因子的表達(dá)，以初

2、步闡明腎陽虛對(duì)“肺主氣”功能影響的機(jī)制。
　　 方法:本課題采用6周齡Wistar大鼠60只，雄性，隨機(jī)分為正常組、模型組、右歸丸組，除正常組外，其余各組大鼠采用肌注氫化可的松建立腎陽虛大鼠模型。正常組大鼠每日上午8:00給予臀部肌肉注射生理鹽水5ml/kg體重，連續(xù)15天，此后每天灌胃生理鹽水10ml/kg體重，連續(xù)30天;模型組大鼠每日上午8:00給予臀部肌肉注射氫化可的松25mg/kg體重，連續(xù)15天，造模結(jié)束次日，每天灌

3、胃生理鹽水10ml/kg體重，連續(xù)30天;右歸丸組大鼠每日上午8:00給予臀部肌肉注射氫化可的松25mg/kg體重，連續(xù)15天，造模結(jié)束次日，每天灌胃右歸丸混懸液10ml/kg體重（藥物濃度為0.243g/ml），連續(xù)30天。①造模結(jié)束次日及灌胃結(jié)束次日，所有實(shí)驗(yàn)大鼠取24小時(shí)尿液，腹主動(dòng)脈采血后，檢測(cè)24小時(shí)尿17-CS-OH及血清睪酮(T)含量;②造模結(jié)束次日及灌胃結(jié)束次日，用實(shí)驗(yàn)小動(dòng)物肺功能測(cè)定儀測(cè)定用力肺活量(FVC)等呼吸功能

4、指標(biāo);③免疫組化和Western Blot檢測(cè)肺組織AngⅡ、AT1R蛋白的表達(dá);④Western Blot檢測(cè)肺組織AQP3、AQP4蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)肺組織AQP3mRNA、AQP4mRNA基因的表達(dá);⑤Western Blot檢測(cè)肺組織TLR4、TRAF-6蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)肺組織TLR4mRNA、TRAF-6mRNA基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 ①實(shí)驗(yàn)大鼠尿17-OH-CS、血清T含量檢測(cè)

5、結(jié)果:第46天時(shí)，與正常組比較，模型組大鼠尿17-OH-CS、血清T含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與右歸丸組比較，模型大鼠尿17-OH-CS和血清T含量較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 ②實(shí)驗(yàn)大鼠呼吸功能檢測(cè)結(jié)果:與正常組比較，模型組大鼠FVC、FEV0.3均顯著降低（P＜0.05），動(dòng)脈血PH、PaO2、SaO2顯著降低，PaCO2顯著升高（P＜0.05）;與模型組比較，右歸丸組大鼠FVC、FEV0

6、.3等顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 ③實(shí)驗(yàn)大鼠血液循環(huán)系統(tǒng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:免疫組化中AngⅡ、AT1R蛋白陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈現(xiàn)棕黃色，第46天時(shí)，與正常組比較，模型組大鼠肺組織AngⅡ表達(dá)減少，AT1R表達(dá)也減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與模型組比較，右歸丸組大鼠肺組織AngⅡ和AT1R表達(dá)較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 ④實(shí)驗(yàn)大鼠水液代謝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:Western Blot和

7、RT-PCR分別檢測(cè)出蛋白和基因的含量，與正常組比較，模型組大鼠肺組織AQP3、AQP4蛋白和基因表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與模型組比較，右歸丸組大鼠肺組織AQP3、AQP4表達(dá)較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 ⑤實(shí)驗(yàn)大鼠免疫功能指標(biāo)TLR4、TRAF-6檢測(cè)結(jié)果:Western Blot和RT-PCR檢測(cè)，與正常組比較，模型大鼠肺組織TLR4、TRAF-6的表達(dá)顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

8、＜0.05）;與模型組比較，右歸丸組大鼠肺組織TLR4和TRAF-6的表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 ①采用氫化可的松建立腎陽虛大鼠模型，根據(jù)模型大鼠的一般狀況，以及24小時(shí)尿液17-OH-CS和血清T含量顯著降低的特點(diǎn)，提示腎陽虛模型建立成功。
　　 ②模型大鼠呼吸功能各項(xiàng)指標(biāo)下降，血液生化指標(biāo)異常，小氣道阻力增加，氣流受限，肺通氣功能障礙，影響了血液生化指標(biāo)的改變;而右歸

9、丸組大鼠各項(xiàng)呼吸功能指標(biāo)及血液生化指標(biāo)明顯改善，表明腎陽虛可以影響模型大鼠肺的呼吸功能，溫補(bǔ)腎陽名方——右歸丸可以明顯改善腎陽虛大鼠由于呼吸功能異常而引起的血液生化異常，從而緩解腎陽虛對(duì)“肺司呼吸”的影響。
　　 ③模型大鼠肺組織AngⅡ、AT1R的表達(dá)明顯下降，表明腎陽虛大鼠體內(nèi)血液循環(huán)受到影響;溫補(bǔ)腎陽名方——右歸丸可以通過增加模型大鼠肺組織AngⅡ和AT1R的表達(dá)，從而緩解腎陽虛對(duì)“肺朝百脈”的影響。
　　 ④模型

10、大鼠肺組織AQP3、AQP4的表達(dá)明顯下降，表明腎陽虛大鼠肺內(nèi)水液代謝受到影響;溫補(bǔ)腎陽名方——右歸丸可以增加模型大鼠肺組織AQP3、AQP4的表達(dá)，從而緩解腎陽虛對(duì)“肺主通調(diào)水道”的影響。
　　 ⑤模型大鼠肺組織TLR4、TRAF-6的表達(dá)明顯下降，表明腎陽虛大鼠免疫功能受到影響;溫補(bǔ)腎陽名方——右歸丸可以增加模型大鼠肺組織TLR4、TRAF-6的表達(dá)，從而緩解腎陽虛對(duì)“肺主衛(wèi)外”的影響。
　　 本課題率先從“肺司呼吸

11、”、“肺主通調(diào)水道”、“肺朝百脈”、“肺主衛(wèi)外”等方面解釋了“肺主氣”的理論內(nèi)涵;用氫化可的松注射方法成功建立出了腎陽虛大鼠模型，模型大鼠存在“肺司呼吸”、“肺主通調(diào)水道”、“肺朝百脈”、“肺主衛(wèi)外”等方面的異常變化，其肺組織存在AngⅡ、AQP、TLR4低表達(dá)的病理狀態(tài)，右歸丸具有提高模型大鼠“肺司呼吸”、“肺主通調(diào)水道”、“肺朝百脈”、“肺主衛(wèi)外”等方面功能的作用，推測(cè)其作用機(jī)制可能是通過增強(qiáng)其AngⅡ、AQP、TLR4的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)