右歸丸干預老齡腎陽虛體質(zhì)分子調(diào)控機制研究.pdf

1、目的：探討右歸丸對老齡腎陽虛體質(zhì)干預的分子調(diào)控機制，為臨床上腎陽虛的防治以及右歸丸的運用提供科學依據(jù)。
　　方法：（1）采用腎陽虛證辨證因子評分細則表，對右歸丸（9g/次，日三次）治療28天的老齡腎陽虛體質(zhì)者進行半定量的療效評價。
　　（2）采用miRNA表達譜芯片技術對老齡腎陽體質(zhì)者治療前（陽虛組）、治療后（治療組）、健康對照組這三組的miRNAs進行檢測，并比較分析三組中差異表達miRNAs。
　?。?）根據(jù)差異表

2、達miRNAs在三組中具體表達量的改變、結(jié)合中醫(yī)腎陽虛衰和Pubmed中文獻報道的相關性，篩選出目的miRNAs，并采用qRT-PCR技術進一步驗證分析。
　?。?）對篩選出的目的miRNAs，通過TargetScan軟件進行靶基因預測，以Total context+scores<-0.6core，Aggregate PCT>0.8為靶基因篩選標準。
　?。?）采用焦磷酸測序技術對目的miRNAs預測的靶基因和前期篩選的腎陽

3、虛免疫相關基因（共10條基因）的甲基化水平進行檢測，并比較分析三組中甲基化水平差異的基因。
　?。?）采用qRT-PCR技術對目的miRNAs預測的靶基因和前期篩選的腎陽虛免疫相關基因（共10條基因）進一步驗證分析。
　　結(jié)果：（1）右歸丸對老齡腎陽虛體質(zhì)干預有效，尤其以其“腰膝酸痛”、“畏寒怕冷”、“四肢發(fā)冷”、“腰背發(fā)冷”、“小便頻多”的癥狀改善明顯，以“下肢水腫”、“大便溏稀”、“痰白清稀”改善不明顯。
　　（2

4、）miRNA表達譜芯片結(jié)果顯示陽虛組與健康組共有63條差異表達miRNAs，陽虛組與治療組共有6條差異表達miRNAs，治療組與健康組共有50條差異表達miRNAs。
　?。?）共篩選出6條miRNAs為目的miRNAs。qRT-PCR統(tǒng)計結(jié)果顯示5條miRNAs有統(tǒng)計學意義。其中在右歸丸干預后，有2條基因的表達存在差異。
　　（4）通過目的miRNAs的靶基因預測共獲得6條基因。
　?。?）焦磷酸測序統(tǒng)計結(jié)果顯示4條

5、基因有統(tǒng)計學意義，其中在右歸丸干預后，有3條基因發(fā)生了甲基化增強或去甲基化的效應。
　?。?）10條基因的qRT-PCR統(tǒng)計結(jié)果顯示6條基因有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：（1）右歸丸通過溫補腎陽，填精益髓的功用對“寒象”和“精虧”改善明顯，但在調(diào)節(jié)機體水液方面有所欠缺；同年齡段健康者從癥狀上提示亦存在一定程度的腎陽不足。
　?。?）老齡腎陽虛體質(zhì)可能多與腫瘤發(fā)生、腦部功能障礙或疾病、心臟血管功能或疾病、情志疾病、生殖功能或

6、疾病、衰老等相關，體現(xiàn)了腎陽虛衰，推動氣化不足、藏精化精無力及心腎相關、腦腎相關的特點。
　?。?）右歸丸可能通過調(diào)節(jié)miRNAs的表達和DNA甲基化修飾的雙重機制調(diào)控BMP7、DICER1、NF1、FLT1的表達，AXIN1和SSTR5可能是其發(fā)揮間接作用的靶點。
　?。?）老齡腎陽虛體質(zhì)具有相對穩(wěn)定性，徹底改變可能需要一個長期的過程。本次研究提示右歸丸通過溫補腎陽，填精益髓，可能降低了老齡腎陽虛體質(zhì)相關腫瘤、功能障礙及疾