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文檔簡介
1、目的:探討右歸丸對老齡腎陽虛體質(zhì)干預(yù)的分子調(diào)控機(jī)制,為臨床上腎陽虛的防治以及右歸丸的運(yùn)用提供科學(xué)依據(jù)。
方法:(1)采用腎陽虛證辨證因子評分細(xì)則表,對右歸丸(9g/次,日三次)治療28天的老齡腎陽虛體質(zhì)者進(jìn)行半定量的療效評價。
?。?)采用miRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)對老齡腎陽體質(zhì)者治療前(陽虛組)、治療后(治療組)、健康對照組這三組的miRNAs進(jìn)行檢測,并比較分析三組中差異表達(dá)miRNAs。
(3)根據(jù)差異表
2、達(dá)miRNAs在三組中具體表達(dá)量的改變、結(jié)合中醫(yī)腎陽虛衰和Pubmed中文獻(xiàn)報(bào)道的相關(guān)性,篩選出目的miRNAs,并采用qRT-PCR技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證分析。
(4)對篩選出的目的miRNAs,通過TargetScan軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測,以Total context+scores<-0.6core,Aggregate PCT>0.8為靶基因篩選標(biāo)準(zhǔn)。
?。?)采用焦磷酸測序技術(shù)對目的miRNAs預(yù)測的靶基因和前期篩選的腎陽
3、虛免疫相關(guān)基因(共10條基因)的甲基化水平進(jìn)行檢測,并比較分析三組中甲基化水平差異的基因。
?。?)采用qRT-PCR技術(shù)對目的miRNAs預(yù)測的靶基因和前期篩選的腎陽虛免疫相關(guān)基因(共10條基因)進(jìn)一步驗(yàn)證分析。
結(jié)果:(1)右歸丸對老齡腎陽虛體質(zhì)干預(yù)有效,尤其以其“腰膝酸痛”、“畏寒怕冷”、“四肢發(fā)冷”、“腰背發(fā)冷”、“小便頻多”的癥狀改善明顯,以“下肢水腫”、“大便溏稀”、“痰白清稀”改善不明顯。
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4、)miRNA表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示陽虛組與健康組共有63條差異表達(dá)miRNAs,陽虛組與治療組共有6條差異表達(dá)miRNAs,治療組與健康組共有50條差異表達(dá)miRNAs。
(3)共篩選出6條miRNAs為目的miRNAs。qRT-PCR統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示5條miRNAs有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中在右歸丸干預(yù)后,有2條基因的表達(dá)存在差異。
?。?)通過目的miRNAs的靶基因預(yù)測共獲得6條基因。
?。?)焦磷酸測序統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示4條
5、基因有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中在右歸丸干預(yù)后,有3條基因發(fā)生了甲基化增強(qiáng)或去甲基化的效應(yīng)。
?。?)10條基因的qRT-PCR統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示6條基因有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:(1)右歸丸通過溫補(bǔ)腎陽,填精益髓的功用對“寒象”和“精虧”改善明顯,但在調(diào)節(jié)機(jī)體水液方面有所欠缺;同年齡段健康者從癥狀上提示亦存在一定程度的腎陽不足。
?。?)老齡腎陽虛體質(zhì)可能多與腫瘤發(fā)生、腦部功能障礙或疾病、心臟血管功能或疾病、情志疾病、生殖功能或
6、疾病、衰老等相關(guān),體現(xiàn)了腎陽虛衰,推動氣化不足、藏精化精無力及心腎相關(guān)、腦腎相關(guān)的特點(diǎn)。
?。?)右歸丸可能通過調(diào)節(jié)miRNAs的表達(dá)和DNA甲基化修飾的雙重機(jī)制調(diào)控BMP7、DICER1、NF1、FLT1的表達(dá),AXIN1和SSTR5可能是其發(fā)揮間接作用的靶點(diǎn)。
(4)老齡腎陽虛體質(zhì)具有相對穩(wěn)定性,徹底改變可能需要一個長期的過程。本次研究提示右歸丸通過溫補(bǔ)腎陽,填精益髓,可能降低了老齡腎陽虛體質(zhì)相關(guān)腫瘤、功能障礙及疾
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