右歸丸延緩陽虛小鼠衰老進程的多靶點研究.pdf

1、目的：初步論證右歸丸改善陽虛小鼠體質，延緩衰老的效應。從能量代謝細胞器線粒體的修復以及多個免疫、衰老相關基因、蛋白表達水平的差異研究，部分揭示右歸丸改善陽虛體質，延緩衰老的生物學機制，為中醫(yī)體質辨證與養(yǎng)生防衰提供科學依據(jù)。
　　方法：1.參照肖小河動物溫度趨向性行為學智能檢測系統(tǒng)原理，設計簡易動物寒熱趨向模型篩選陽虛體質老齡小鼠，隨機分為陽虛治療組、陽虛空白組和非陽虛對照組，陽虛治療組經(jīng)右歸丸干預后，以非陽虛質小鼠作為對照組，對其

2、效應進行客觀評價；
　　2.采用透射電鏡觀察3個組心腦組織線粒體的超微結構變化；
　　3.基于課題組前期研究結果，采用RT-PCR法研究治療后，陽虛治療組、陽虛空白組和非陽虛對照組間全血樣本中衰老相關基因（FHIT、HBD、MAP2K6、WNT5B、CSNK1D、FRAT2、DAPK2、GSK3A）和海馬組織中BDNF與TrKB的表達水平差異；采用原位雜交法研究下丘腦中衰老相關基因（CaM）在3個組間的表達水平差異；

3、　　4.采用免疫組化法研究3個組間心、脾、腎和腦組織中免疫與衰老相關蛋白：FHIT、HBD、MAP2K6、WNT5B、CSNK1D、FRAT2、DAPK2和GSK3A的表達水平差異；血液中SOD酶及MDA在3個組間表達水平的差異；
　　結果：1.陽虛治療組用藥后，飼料消耗率和肛溫顯著升高，體重和趨40度溫控板頻率降低；與陽虛空白組相比，飼料消耗率、肛溫、體重和趨40度溫控板頻率有統(tǒng)計學意義，生存時間有增長的趨勢；腎、心、肺、脾、睪

4、丸、腎上腺的臟器指數(shù)有降低趨勢，肝、胸腺有升高的趨勢。
　　2.3個組老齡小鼠心腦組織線粒體腫脹程度和線粒體嵴斷裂程度按非陽虛對照組、陽虛治療組和陽虛空白組的順序逐次加重。
　　3.與陽虛空白組相比，陽虛治療組CSNK1D,DAPK2和WNT5B基因表達量顯著降低（P<0.05），BDNF、TrKB、HBD1和CaM基因表達量顯著升高（P<0.05）；與非陽虛對照組相比，陽虛治療組DAPK2和WNT5B基因表達量極顯著降低（

5、P<0.01），MAP2K6和CaM基因表達量顯著升高（P<0.05）；
　　4.與陽虛空白組相比，陽虛治療組心臟組織中WNT5B和FRAT2的蛋白表達量呈極顯著降低(P<0.01)；脾臟組織中HBD1的蛋白表達量極顯著升高（P<0.01），GSK3A、WNT5B和FRAT2的蛋白表達量極顯著降低（P<0.01），DAPK2的蛋白表達量顯著降低(P<0.05)；腎臟組織中WNT5B、CSNK1D和GSK3A的蛋白表達量均極顯著降低

6、(P<0.05)，MAP2K6蛋白表達量顯著升高；腦組織中WNT5B的蛋白表達量極顯著降低(P<0.01)，CSNK1D、FRAT2和GSK3A的蛋白表達量呈顯著降低(P<0.05)，MAP2K6蛋白表達量顯著升高。
　　與非陽虛對照組相比，陽虛治療組脾臟組織中MAP2K6的蛋白表達量顯著降低(P<0.05)，DAPK2的蛋白表達量顯著升高(P<0.05)；腎臟組織中CSNK1D和DAPK2的蛋白表達量均顯著性升高(P<0.05)

7、，MAP2K6顯著性降低(P<0.05)；腦組織中CSNK1D和FRAT2的蛋白表達量顯著升高(P<0.05)，F(xiàn)HIT顯著降低(P<0.05)，HBD1極顯著降低(P<0.01)。
　　結論：1.初步論證了“改善陽虛體質可能延緩衰老進程”的科學假說；
　　2.線粒體超微結構的修復或為右歸丸改善陽虛延緩衰老的重要機制之一；
　　3.抑制細胞凋亡、抑制腫瘤發(fā)生、平衡生物鐘、增強免疫應答和抑制過氧化損傷可能是右歸丸改善陽虛