rSjFBPA和rSjCystatin對NOD小鼠1型糖尿病的干預(yù).pdf

1、目的：
　　1型糖尿?。═1DM）是以T細胞介導(dǎo)的特異性胰島β細胞損傷為特征的自身免疫性疾病，大量的研究已經(jīng)證實，多數(shù)慢性器官特異性損傷的自身免疫性疾病都與Th1/Th2免疫失衡、調(diào)節(jié)性T細胞（CD4+CD25+highFoxP3+，Treg）和Th17異常增殖有關(guān)。此外，也有研究報道，蠕蟲感染、蟲體或蟲卵的抗原免疫能夠誘導(dǎo)調(diào)節(jié)T細胞和Th2細胞的增殖，可以阻止或減輕自身免疫病的發(fā)生，在T1DM動物模型試驗中同樣取得滿意的結(jié)果。本

2、研究擬利用從血吸蟲成蟲已篩選和鑒定出的 Th2型優(yōu)勢應(yīng)答的免疫調(diào)節(jié)分子重組日本血吸蟲果糖二磷酸醛縮酶（rSjFBPA）和半胱氨酸蛋白酶抑制劑（rSjCystatin），在 NOD小鼠糖尿病發(fā)生前進行干預(yù)，評估免疫后 NOD小鼠糖尿病發(fā)生及發(fā)展情況，觀察干預(yù)后 NOD小鼠體內(nèi) Th1、Th2、Th17和 Treg細胞以及相應(yīng)細胞因子的水平，闡明重組抗原的免疫調(diào)節(jié)機制，為糖尿病的預(yù)防和治療開辟新的途徑。
　　方法：
　　將4w齡

3、 NOD小鼠隨機分成三組，每周分別用相同劑量或體積的 PBS（100μl/只）、rSjFBPA（50μg/只）和rSjCystatin（50μg/只）腹腔注射，連續(xù)注射四周。為了加速NOD小鼠T1DM的發(fā)生，在小鼠7w齡和9w齡時用200g/kg環(huán)磷酰胺作兩次大劑量腹腔注射。小鼠從第四周開始每周檢測一次血糖和體重。在第二次注射環(huán)磷酰胺3周后將小鼠麻醉處死，取胰腺進行HE染色和免疫組化檢測胰島素分泌情況，觀察小鼠胰腺的β細胞數(shù)量和胰小島等

4、病理變化，評估糖尿病的發(fā)生和發(fā)展情況。分離免疫小鼠的脾臟單個核細胞，體外PMA和離子霉素重新刺激，收集培養(yǎng)細胞和培養(yǎng)上清，分別用Real-time PCR、FCM、ELISA檢測Th1、Th2、Treg和Th17細胞增殖及相關(guān)細胞因子表達情況，比較PBS對照組與rSjFBPA和rSjCystatin干預(yù)后NOD小鼠糖尿病的發(fā)生和發(fā)展情況。
　　結(jié)果：
　　相對于PBS處理組，rSjFBPA和rSjCystatin處理組的NO

5、D小鼠T1DM的發(fā)病率明顯減少，平均血糖水平明顯降低，并且發(fā)病時間也有明顯延遲，體重明顯增加；rSjFBPA和rSjCystatin處理組的胰腺組織HE染色和免疫組化也顯示了炎癥浸潤減輕、胰島功能保留相對較好。Real-time PCR、FCM和 ELISA測定的Th1、Th2、Th17和Treg細胞以及相應(yīng)細胞因子水平結(jié)果表明，以IL-4為代表的Th2和以IL-10和TGF-β為代表的Tregs上調(diào)，而以IFN-γ為代表的Th1下調(diào)，